人源可溶性B淋巴细胞刺激因子在大肠埃希菌中的类泛素蛋白融合表达及鉴定

发布时间：2017-08-01 14:33

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【摘要】：目的 B淋巴细胞刺激因子(B cell activating factor belonging to the TNF family,BAFF)作为肿瘤坏死因子(tumor necrosing factor,TNF)家族的成员,在B细胞增殖和成熟方面具有重要作用,其缺陷和过表达均能引起机体免疫失衡,诱发自身免疫性疾病,因此获得纯化BAFF蛋白对研究其功能尤为重要。文中采用类泛素蛋白(small ubiquitin-related modifier,SUMO)融合表达系统,构建pET28a/SUMO-BAFF表达载体,经诱导表达和酶切获得纯度较高的人源B淋巴细胞刺激因子(human soluble BAFF,hsBAFF)蛋白,为进一步研究其免疫调节作用奠定了基础。方法 Over-lap PCR方法连接hsBAFF和SUMO基因,构建融合蛋白表达载体pET28a/SUMO-BAFF,测序鉴定后转化至大肠埃希菌,经半乳糖苷诱异剂(isopropul-betaD-thiogalactoside,IPTG)诱导表达和Ni2+-IDA Sepharose CL-6B亲和层析柱纯化蛋白SUMO-hsBAFF,后经SUMO特异性蛋白酶切割和Ni2+-IDA-Sepharose CL-6B亲和层析柱纯化获得hsBAFF蛋白。结果测序证实pET28a/SUMO-BAFF表达载体构建成功,SDS-PAGE与Western blot鉴定获得纯化的融合蛋白SUMO-hsBAFF和经酶切后高纯度的蛋白hsBAFF。结论 SUMO融合表达系统能获得高表达的可溶性目的蛋白,纯化过程简单、高效,为进一步研究蛋白质结构和药物开发奠定基础。
【作者单位】： 南京军区南京总医院医学影像科;
【关键词】： B淋巴细胞刺激因子 类泛素蛋白 大肠埃希菌 表达
【基金】：南京军区南京总医院科研基金(2012042)
【分类号】：R346
【正文快照】： 0引言BAFF是一种细胞因子,作为TNF家族的第17位成员,它能与B淋巴细胞特异性结合,诱导其增殖、分化并分泌IgG、IgA和IgM等免疫球蛋白,在体液免疫反应中发挥着重要作用[1-2],其过表达会引起自身免疫性疾病(如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎及干燥综合征等)的发生与发展[3-5]。实

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 陈恒悦;王畅;肖黎明;陈丽华;;B淋巴细胞刺激因子家族相关分子在系统性红斑狼疮治疗中的应用[J];医学研究生学报;2010年11期

2 郭英华;陈思娇;宋今丹;;核因子-κB信号通路中小泛素样修饰蛋白与2型糖尿病的关系[J];医学研究生学报;2011年05期

3 徐海;张启高;;系统性红斑狼疮合并心肌梗死6例病例报告[J];医学研究生学报;2011年10期

4 邓春梅;葛玉强;刘丽;王也;林运鸿;;外源基因表达系统的研究进展[J];现代生物医学进展;2010年19期

5 韦玮;张浩;毛建平;叶棋浓;;蛋白质SUMO化修饰研究进展[J];中国生物工程杂志;2008年07期

6 欧阳萍;高宇;雷连成;尹立子;江丽娜;吕爽;冯新;韩文瑜;;人溶菌酶-抗菌肽tachyplesins融合蛋白的原核表达及其抗菌活性[J];中国生物制品学杂志;2010年08期

7 包义风;应莲芳;蒋琳;;包涵体蛋白复性技术研究进展[J];微生物学免疫学进展;2012年02期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 马晓璞;侯丽娟;张世龙;王新朝;李文华;;HIF SUMO化在高原低氧适应中的作用[J];中国医药科学;2012年21期

2 石尧;闫峰;聂闯;葛轶睿;黄振平;;狼疮性肾炎与干眼症的相关性分析[J];医学研究生学报;2012年03期

3 庞实锋;付宏岐;郑克勤;廖霞;梁朋;曹定国;陈小萍;周汝滨;;一种具杀菌功能的haFGF融合基因在毕氏酵母中的表达[J];南昌大学学报(医学版);2010年12期

4 张剑姝;张冰;周敏;胡悦;陈思娇;宋今丹;;核因子-κB与糖尿病肾病的关系及其基因多态性研究进展[J];医学研究生学报;2012年07期

5 徐佳;;抗菌肽及其研究进展[J];绵阳师范学院学报;2012年05期

6 王统彩;陈思娇;宋今丹;;sumo化及sumo化修饰酶对糖尿病肾病NF-κB信号通路的调控[J];医学研究生学报;2013年01期

7 李玮妮;陈立涵;程龙;徐小洁;付洁;关鑫;刘婕;张浩;叶棋浓;;慢病毒介导的敲低UBC9表达抑制ERβ类泛素化修饰水平[J];军事医学;2013年03期

8 胡金川;田亚平;江朝光;温新宇;高艳红;董矜;郭广宏;王玲;董振南;;红细胞补体受体1分子水平及其基因单核苷酸多态性与系统性红斑狼疮的关联研究[J];医学研究生学报;2013年07期

9 尤燕舞;廖品琥;;Fractalkine参与狼疮性肾炎发病机制的研究进展[J];医学研究生学报;2013年07期

10 欧阳涵;石永兵;沈华英;施晓松;王峙;卢颖;冯胜;;CD4~+ IL-9~+ T细胞及CD4~+ EBI3~+ T细胞在系统性红斑狼疮患者外周血中的变化及意义[J];医学研究生学报;2013年08期

中国博士学位论文全文数据库 前7条

1 刘小民;华北大黑鳃金龟中肠cDNA文库的构建及其围食膜靶标蛋白的分离与鉴定[D];河北农业大学;2011年

2 徐立新;MeJA对人参DS基因表达的影响及DS在酵母中的表达[D];吉林大学;2011年

3 王晓y=;肌纤生成调节因子-1致心肌细胞肥大的分子机制研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年

4 姚正颖;Issatchenkia terricola XJ-2乙醛脱氢酶的纯化和性质及其基因的克隆与表达[D];南京农业大学;2011年

5 孙海新;鸡肉中金刚烷胺残留的生物识别材料研究与亲和检测方法建立[D];中国海洋大学;2013年

6 张烨;球孢白僵菌疏水表面结合蛋白HsbA的克隆及功能研究[D];中国农业科学院;2013年

7 孔祥辉;金针菇免疫调节蛋白（FIP-fve）表达特性及活性特征研究[D];东北林业大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 刘开泉;利用原核系统表达富含二硫键蛋白质的探索与改进[D];山东农业大学;2011年

2 屈玉玲;沉默高尔基体P115基因对胃癌细胞凋亡的影响[D];重庆医科大学;2011年

3 贺宝军;犬MC4R基因的原核表达与纯化[D];辽宁医学院;2011年

4 张艳艳;重组鲶鱼抗菌肽ParasinⅠ在大肠杆菌中的表达、纯化及抗菌活性分析[D];四川农业大学;2011年

5 付登峰;类牛源抗菌肽LNK-16在大肠杆菌中的串联表达[D];河南科技学院;2011年

6 顾育育;l32基因的敲除和过表达菌株的构建及其生长特性研究[D];南京师范大学;2011年

7 侯乐锋;大肠杆菌表达重组人胰激肽原酶[D];北京化工大学;2011年

8 李薇;携带Ubc9基因的病毒表达载体的构建及其在细胞中的表达[D];青岛大学;2011年

9 胡日查;SARS冠状病毒木瓜样蛋白酶生物学功能研究[D];内蒙古农业大学;2010年

10 杨洁;富含脯氨酸的酪氨酸激酶在系统性红斑狼疮淋巴细胞中的表达及意义[D];山西医科大学;2012年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 于文国;陶秀娥;;包涵体蛋白复性及其影响因素[J];河北工业科技;2007年05期

2 王君,林莹,卢滇楠,刘铮;CTAB辅助溶菌酶复性过程动力学[J];化工学报;2004年09期

3 王骊丽;耿信笃;;源于大肠杆菌蛋白的表达、液相色谱复性与纯化新进展[J];中国科学(B辑:化学);2009年08期

4 岳建华;潘秀珍;王长军;李先富;唐家琪;;人源抗Rh(D)单链抗体基因的克隆和表达[J];医学研究生学报;2006年04期

5 郭铭;王金泉;唐政;胡伟新;季大玺;刘志红;黎磊石;;血液净化治疗系统性红斑狼疮合并血栓性血小板减少性紫癜的疗效观察[J];医学研究生学报;2008年10期

6 张春妮;史蓓蕾;王相栋;汪俊军;刘小传;李克;;检测血清β_2-GPI/ox-LDL复合物对系统性红斑狼疮的临床诊断价值[J];医学研究生学报;2009年05期

7 丁小军;孙坚;;小泛素样修饰物修饰与肿瘤相关研究进展[J];医学研究生学报;2009年07期

8 韩爱忠;胡兵;汪俊军;;类风湿关节炎和系统性红斑狼疮与动脉粥样硬化的关系[J];医学研究生学报;2009年08期

9 高阳;田树旭;常小丽;付建平;周敏;胡悦;陈思娇;宋今丹;;雷帕霉素靶蛋白的蛋白信号通路及其与代谢性疾病相关性[J];医学研究生学报;2010年02期

10 林静;孙凌云;;系统性红斑狼疮患者外周血调节性T细胞研究进展[J];医学研究生学报;2010年04期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 郑伟;中国鲎（Tachypleus tridentatus）基因工程抗菌肽的制备及其生物活性研究[D];吉林大学;2005年

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

1 黄亚渝;蛋白质的液相色谱复性[D];第四军医大学;2002年

2 吕爽;人溶菌酶基因hLYZ在毕赤酵母及小鼠乳腺中的表达及其生物活性研究[D];吉林大学;2009年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陆书华;尚玮;徐建设;李晓霞;钟启平;;大肠埃希菌脂多糖脂质体的制备及免疫保护实验[J];中国病原生物学杂志;2008年05期

2 金法祥;俞建洪;糜祖煌;;大肠埃希菌老年患者分离株β-内酰胺酶基因与毒力基因研究[J];中华医院感染学杂志;2009年04期

3 夏培元,冯萍,钟利,吕晓菊,雷秉钧;3′BS-PCR方法探测氟喹诺酮耐药大肠埃希菌gyrA基因248位点突变的探讨[J];中华医院感染学杂志;2001年05期

4 郭祥翠,李俄成,郑如峰;超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的耐药性[J];现代医药卫生;2003年06期

5 卢月梅,何林,陈升汶,张阮章,吴劲松,吴伟元;呼吸道产超广谱β-内酰胺酶分离株耐药基因初步分型[J];中国微生态学杂志;2004年06期

6 王刚,李武平,张成海,衣作安,郑丽舒,张辉,段招军,侯云德;新型重组人IFN-λ2的高效表达、纯化与抗病毒活性研究[J];中华实验和临床病毒学杂志;2005年03期

7 张哲;蒋晓飞;李敏;吕元;;SHV-12型超广谱β-内酰胺酶特性的研究[J];检验医学;2006年01期

8 张勇昌;;AmpC酶的研究进展[J];医学文选;2006年02期

9 钟艺;冯霞;张春梅;杨俊何;林红燕;;产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的分离率与抗菌药物消耗量相关性研究[J];医药世界;2006年05期

10 刘衡川;兰全学;;多重耐药大肠埃希菌中I类整合子的研究[J];中国感染与化疗杂志;2006年03期

中国重要会议论文全文数据库 前7条

1 陈国忠;安敏飞;周成杰;汪一萍;鲁勇;应建飞;俞燕红;贺明阳;;多耐药大肠埃希菌毒力基因研究[A];首届西湖重症医学论坛暨2011年浙江省重症医学学术年会论文汇编[C];2011年

2 雷明军;吴少庭;戴五星;潘晖榕;林绮萍;温见翔;黄达娜;高世同;张仁利;;弓形虫RH株膜表面抗原2全长基因的高效表达与抗原性分析[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年

3 刘刚;陶传敏;翟朝阳;;利用RAPD技术绘制不同病原微生物基因指纹图[A];中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集[C];2003年

4 邢玉斌;索继江;陈世平;贾宁;;细菌的耐药性[A];中华医院管理学会医院感染管理专业委员会第九届医院感染管理学术年会论文汇编[C];2002年

5 杨果杰;陈秀莲;邵萍;;内毒素法兔发热动物模型及其标准化的研究[A];中国实验动物学会第五届学术年会论文汇编[C];2000年

6 俞云松;;革兰阴性菌耐药机制研究进展[A];第8届全国抗菌药物临床药理学术会议暨北京大学临床药理研究所成立三十周年论文集[C];2010年

7 许景峰;徐琳;;产ESBLs菌株Ⅰ类整合子分布与耐药基因的研究[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年

中国重要报纸全文数据库 前3条

1 刘伯宁;我国的“超级细菌”来自哪里?[N];南方周末;2010年

2 刘伯宁;“超级细菌”来袭 抗生素开发告急[N];医药经济报;2010年

3 特约记者 晓嘉;超级细菌：来势凶猛 并非无敌[N];医药经济报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 余方友;大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌16S rRNA甲基化酶基因的筛选及转移机制研究[D];复旦大学;2011年

2 郑铃;致肾盂肾炎大肠埃希菌粘附素基因papG的克隆表达及其免疫保护作用的初步研究[D];天津医科大学;2003年

3 吴庆刚;国内分离的致肾盂肾炎大肠埃希菌papA和papG基因分型的研究[D];天津医科大学;2003年

4 薛晓畅;B淋巴细胞刺激因子治疗性疫苗的研究[D];第四军医大学;2005年

5 李家斌;产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌流行病学及分子生物学研究[D];浙江大学;2002年

6 刁振宇;Ⅰ.毕赤酵母表达可溶性hsBAFF的纯化及生物学性质研究 Ⅱ.昆虫杆状病毒靶向肝癌基因治疗的研究[D];南京师范大学;2007年

7 熊自忠;革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶的研究[D];复旦大学;2003年

8 王明华;qnr介导细菌对喹诺酮类耐药机制的研究[D];复旦大学;2010年

9 朱卫民;肺炎克雷伯菌β—内酰胺酶耐药机制研究[D];重庆医科大学;2002年

10 王国庆;基于生物信息学的肠出血性大肠埃希菌O157：H7的致病机制及诊断靶标的研究[D];吉林大学;2010年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 胡亚;银花泌炎灵片对大肠埃希菌的抑菌作用及抑菌机理的初步研究[D];吉林大学;2013年

2 赵庆英;大肠埃希菌临床株质粒介导的喹诺酮类耐药机制的研究[D];天津医科大学;2011年

3 杜yN;渗透压对大肠埃希菌水通道蛋白GlpF基因表达的影响[D];重庆医科大学;2012年

4 朱莉丽;大肠埃希菌多重耐药外排泵AcrAB-TolC主动外排机制的研究[D];天津医科大学;2013年

5 张志远;大肠埃希菌ampC基因LAMP检测方法的建立及其初步应用[D];南方医科大学;2013年

6 钱雪峰;产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性及耐药基因分型的研究[D];苏州大学;2003年

7 吴玉荣;人B淋巴细胞刺激因子载体稳定性及其嵌合毒素的表达载体构建与产物性质鉴定[D];南京师范大学;2005年

8 徐鸿博;临床分离大肠埃希菌产ESBLs的基因型及耐药性研究[D];中国医科大学;2007年

9 兰全学;整合子—基因盒系统介导和传播耐药性的研究[D];四川大学;2005年

10 祁汝峰;伤寒沙门菌耐药质粒pRST98在小鼠体内向大肠埃希菌接合转移的研究[D];苏州大学;2006年

，

本文编号：604746