抗肠炎沙门氏菌单链抗体制备及其特异性分析

发布时间：2017-08-04 07:32

  本文关键词：抗肠炎沙门氏菌单链抗体制备及其特异性分析

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【摘要】：目的:利用基因工程技术制备抗肠炎沙门氏菌的单链抗体。方法:从抗肠炎沙门氏菌单克隆抗体的杂交瘤细胞中纯化RNA,反转录后扩增出抗体的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因片段,采用重叠延伸的方法,用柔性多肽Linker接头(Gly4Ser)3按VL-Linker-VH方式将VH基因和VL基因拼接成单链抗体基因片段后,连接到pGEX-4T-1载体上,进行重组转化。挑取阳性克隆,经IPTG诱导后,通过GST柱进行亲和层析,最后利用ELISA检测抗体的活性。结果:成功构建了表达抗肠炎沙门氏菌单链抗体的基因工程菌株,经SDS-PAGE和ELISA检测结果表明,诱导表达的单链抗体scFv分子量约为60 kDa,其能特异与肠炎沙门氏菌结合,但与副甲伤寒沙门氏菌、鸭沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌有轻度交叉反应。结论:成功构建了抗肠炎沙门氏菌单链抗体的表达菌株,表达的单链抗体scFv可作为沙门氏菌的检测的候选抗体分子。
【作者单位】： 南昌大学生命科学与食品工程学院中德联合研究院;江西中医学院基础医学部;
【关键词】： 沙门氏菌 单链抗体 重链可变区 轻链可变区
【基金】：“十二五”国家科技支撑计划(2011BAK10B06、2011BAK10B01、2011BAK10B02) 国家自然科学基金(31000048、31170091、31260363、81160494) 食品科学与技术国家重点实验室目标导向课题(SKLF-MB-201002) 自由探索课题(SKLF-TS-200916) 赣鄱英才555工程人才计划(2012年)资助项目
【分类号】：R392
【正文快照】： 沙门氏菌是一种重要的食源性致病菌,广泛分布于自然界,至今已有2 523种血清型被发现[1],可引起人类伤寒、副伤寒和食物中毒等许多疾病,直接影响工农业和畜牧业发展,使全球遭受巨大的经济损失。国内外沙门氏菌食物中毒多年来一直位居细菌性食物中毒的首位[2]。在中国细菌性食

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 秦丽莉;张春明;;单链抗体研究进展及其在医学中的应用[J];国外医学(放射医学核医学分册);2005年06期

2 赵贵,张华;畜产品中沙门氏菌的危害及检测方法概述[J];贵州畜牧兽医;2004年03期

3 石凌超;韩红辉;唐U單，

本文编号：618348