基于蓖麻毒素B链的新型黏膜免疫佐剂设计及靶向效果初步评价

发布时间：2017-08-05 07:27

  本文关键词：基于蓖麻毒素B链的新型黏膜免疫佐剂设计及靶向效果初步评价

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【摘要】：目的:利用自主知识产权抗体3E1,确定RTB与细胞特异性结合的活性肽部位,基因工程合成后,动物实验评价绿色荧光蛋白在基于RTB活性肽靶向下在体内的分布,为后续研究奠定基础。方法:用生物信息学技术,确定RTB与细胞特异性结合的活性肽部位;分子克隆技术构建含不同肽的绿色荧光蛋白原核表达载体,实现肽-GFP融合蛋白在大肠杆菌中的高效、可溶性表达;动物实验评价小鼠舌下口服肽-GFP融合蛋白后GFP在体内的分布。结果:建立了自主知识产权单抗3E1与RTB相互作用的空间构象,判定出四个活性区域,构建了4个含不同活性肽的GFP原核表达载体,获得了高纯度蛋白;经舌下口服免疫BALB/c小鼠后,免疫组化和流式细胞术证实,P1-GFP免疫组GFP和CD11c在不同组织中的分布与对照组有明显区别。P1-GFP初次免疫后,GFP主要分布于空肠,再次免疫后,GFP主要集中于回肠、肠相关淋巴组织和小肠PP结;初次免疫后CD11c+细胞主要分布于肠系膜淋巴结,胃和空肠,再次免疫后肠系膜淋巴结中的CD11c+细胞不再占优势,空肠中CD11c+细胞明显增加。结论:基于RTB的活性肽P1与GFP融合蛋白口服免疫小鼠后,P1-GFP经P1肽的导向,初次和再次免疫后GFP在体内的分布不同,再次免疫后范围更广。P1的导向使GFP直接进入小肠PP结和肠系膜淋巴结两个黏膜免疫应答的主要诱导及效应部位,利于免疫应答的发生。
【作者单位】： 海军总医院检验科;海军总医院眼科;军事医学科学院基础研究所;
【关键词】： 蓖麻毒素B链 黏膜免疫 小分子肽 靶向分布
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.30872394)
【分类号】：R392
【正文快照】： 研究和开发能诱导机体产生早期、高效和持久免疫应答的、黏膜免疫佐剂是感染免疫和疫苗领域的热点和重点[1-5]。蓖麻毒素(ricin)B链(RTB)含有两个半乳糖结合部位,几乎能与所有真核细胞上含半乳糖基的糖蛋白或糖酯结合。由于RTB与巨噬细胞和网状内皮细胞结合的这一独特性质,有

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9 陈U，

本文编号：623674