鼠抗人B7-H4单克隆抗体功能研究及鼠抗人B7-H4受体单克隆抗体的制备

发布时间：2017-08-05 20:27

  本文关键词：鼠抗人B7-H4单克隆抗体功能研究及鼠抗人B7-H4受体单克隆抗体的制备

  更多相关文章： B7-H4 共培养 B7-H4受体 单克隆抗体

【摘要】：B7家族是最重要的共刺激分子,在调节T细胞的活化和免疫耐受的动态平衡中起重要调节功能。B7-H4(B7X,B7S1),是B7家族的新成员之一。人的B7-H4基因含有5个内含子和6个外显子,位于人染色体的1p11.1。B7-H4与B7家族其他分子一样,高表达于多种肿瘤组织,例如肺癌,乳腺癌,卵巢癌,胃癌等,而在正常人体组织中却低表达或不表达,这使得B7-H4有望成为一种新的肿瘤标志物。另外,B7-H4作为负性刺激因子,当与其受体结合后,抑制T细胞的增殖、活化和细胞因子的分泌,可以推测B7-H4在肿瘤细胞逃避机体的免疫监视和维持机体的免疫耐受过程中发挥重要作用。然而同样对T细胞信号通路有影响的B7-H4受体还没有被克隆出来,对其报道也不是很多,对于受体的研究有助于我们进一步了解B7-H4在肿瘤组织中的作用机制,并有望成为肿瘤免疫治疗的新靶点。本课题通过构建乳腺癌细胞株MCF-7与急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株共培养体系,模拟体内肿瘤环境,用本科室已制备的鼠抗人B7-H4单克隆抗体5C8阻断MCF-7细胞株上B7-H4分子,抑制B7-H4分子负性调控作用,共培养后检测Jurkat细胞生物学特性的改变。在炎症浸润的人扁桃体部分淋巴细胞中检测到B7-H4受体的表达,并以此为免疫原,制备鼠抗人B7-H4受体的单克隆抗体。一、鼠抗人B7-H4单克隆抗体功能研究【目的】构建共培养体系,研究B7-H4对Jurkat细胞生物学功能的改变。【方法】流式细胞仪技术检测MCF-7细胞B7-H4的表达和Jurkat细胞上B7-H4受体表达,将两细胞共培养72h,收集与MCF-7贴在一起的Jurkat细胞,对其表面CD3、CD69分子表达通过流式细胞技术进行检测,并采用CCK8法对Jurkat的增殖情况进行检测。【结果】MCF-7细胞表面的B7-H4分子能够作用于Jurkat细胞株,促使其细胞表面CD3、CD69分子下调表达,抑制Jurkat细胞增殖。加入B7-H4单克隆抗体5C8共培养后,Jurkat细胞上分子表达和增殖情况则恢复。【结论】B7-H4是一种负性共刺激分子,能够抑制T细胞的增殖和膜分子的表达。二、鼠抗人B7-H4受体单克隆抗体的制备【目的】鼠抗人B7-H4受体单克隆抗体制备,并对其生物学功能进行检测。【方法】以炎症浸润的扁桃体细胞分选出的淋巴细胞作为免疫原,免疫6-8周龄的BALB/c小鼠。取脾脏研磨,与小鼠骨髓瘤细胞株SP2.0融合为杂交瘤株。采用流式细胞技术对杂交瘤株上清进行检测,筛选出阳性杂交瘤株。以B7-H4-mFc-FITC为基础,通过位点竞争抑制实验进一步筛选。将本科室B7-H4受体洗脱蛋白包板后,采用ELISA法对杂交瘤株进一步筛选。对初步确定的杂交瘤株用快速试纸法测定亚型。【结果】筛选出两株疑似的B7-H4受体单克隆抗体命名为3B2和2E2。经位点竞争和ELISA法初步鉴定,3B2比2E2效果稍好,并测定两株抗体的亚型均为IgG2a类。【结论】初步确定获得两株B7-H4受体单克隆抗体的细胞株,该抗体的功能还有待研究。为进一步研究B7-H4与B7-H4受体的分子机制提供基础。
【关键词】：B7-H4 共培养 B7-H4受体 单克隆抗体
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392.11
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 研究背景10-24
• 参考文献19-24
• 第一部分 鼠抗人B7-H4单克隆抗体的功能研究24-34
• 1. 实验试剂与材料24-25
• 2. 实验方法25-28
• 3. 实验结果28-31
• 讨论31-32
• 参考文献32-34
• 第二部分 鼠抗人B7-H4受体的单克隆抗体制备34-48
• 1. 实验材料与试剂35-36
• 2. 实验方法36-41
• 3. 实验结果41-44
• 讨论44-46
• 参考文献46-48
• 总结与展望48-49
• 缩略词表49-51
• 致谢51-52

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 段薇,张健,郑剑玲,苏丹,王美慧;抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的研制[J];微生物学杂志;2004年05期

2 张唯敏;;新单克隆抗体已应用于临床[J];国外医学(肿瘤学分册);1986年04期

3 迟素敏;;单克隆抗体的制备和鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;1986年Z1期

4 张明杰;单克隆抗体在农业中有何用途?[J];细胞与分子免疫学杂志;1991年02期

5 孙国凤;;单克隆抗体药品在日本通过调查会[J];生物技术通报;1991年09期

6 ;一种制备单克隆抗体的更有效而经济的方法[J];国外医学(临床生物化学与检验学分册);1998年05期

7 任新玲,沈丽英,金伯泉,井晓梅,王睿;表皮生长因子受体单克隆抗体抗肺癌作用的研究[J];第四军医大学学报;2000年03期

8 章波,陈惠鹏,范国才,陈吉中,王清明;抗人肝再生增强因子单克隆抗体的研制[J];免疫学杂志;2000年06期

9 李凤英,陈名道,顾卫琼,陈春荣,唐金凤;人瘦素单克隆抗体的鉴定[J];放射免疫学杂志;2000年02期

10 陈志南,蒋建利;单克隆抗体——从鼠到人[J];国外医学(免疫学分册);2000年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 徐爽;安万新;胡荣花;叶萍;孟祥昱;;不同方法收集单克隆抗体浓缩后的比较[A];中国输血1999年年会暨纪念ABO血型发现100周年学术交流论文专辑[C];1999年

2 刘大维;高斌;;狂犬病毒单克隆抗体的研制[A];2010年中国科学院微生物研究所博士后学术年会暨第二届博谊论坛论文摘要集[C];2011年

3 陈炅;;治疗性单克隆抗体的作用靶点及临床应用[A];2013年中国临床药学学术年会暨第九届临床药师论坛论文集[C];2013年

4 徐爽;徐焱;;单克隆抗体在输血领域的应用探讨[A];中国输血1999年年会暨纪念ABO血型发现100周年学术交流论文专辑[C];1999年

5 彭虹;舒翠丽;刘永全;王华;高杰英;;抗人α4单克隆抗体的制备和鉴定[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

6 祭芳;史建荣;陈正贤;徐剑宏;陆琼娴;;抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体的制备[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年

7 张光波;董秋明;於葛华;李文香;张学光;;一株鼠抗人4-1BB单克隆抗体的研制及其生物学功能的鉴定[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年

8 张锦超;杨金菊;吴琼;李戬;陈勇;李辉;宋颖博;罗晓彤;任飞;高媛;杜雪梅;鞠艳芳;王兆卿;王京兰;徐菡;柳晓兰;崔玉芳;钱小红;贺福初;高建恩;孙启鸿;;高效鉴定单克隆抗体所识别未知抗原技术平台的建立及应用[A];中国蛋白质组学第二届学术大会论文摘要论文集[C];2004年

9 杨永昌;王北宁;赖春宁;黎燕;;抗血小板单克隆抗体重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年

10 孙效;高新;尚明美;宋海峰;汤仲明;;抗胰高血糖素样肽单克隆抗体的制备[A];第八次全国药物与化学异物代谢学术会议论文摘要[C];2006年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 记者 尹晖;单克隆抗体研发进入新阶段[N];无锡日报;2010年

2 编译 李勇;单克隆抗体：生物类似药开发的秘钥[N];医药经济报;2014年

3 广凯;单克隆抗体药物将有大发展[N];中国医药报;2000年

4 ;单克隆抗体应用前景看好[N];中国医药报;2002年

5 黄东临;罗氏叱咤单克隆抗体市场[N];医药经济报;2005年

6 ;单克隆抗体异军突起[N];中国高新技术产业导报;2003年

7 尹晖;全球最大单克隆抗体研制基地落户无锡[N];中国医药报;2010年

8 尹晖;最大单克隆抗体研制项目在马山奠基[N];无锡日报;2010年

9 数文;罗氏买进抗癌单克隆抗体[N];中国医药报;2008年

10 毛文波;单克隆抗体：征服癌症的新方法[N];科技日报;2004年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 魏德强;以植物病毒为载体建立新型的载体—半抗原免疫体系[D];东北林业大学;2014年

2 王璞;以CD146为靶点的胃癌早期诊断多功能纳米探针的相关研究[D];第三军医大学;2015年

3 张潇;抗EV71病毒单克隆抗体及柯萨奇病毒病毒样颗粒的制备研究[D];北京工业大学;2015年

4 邹年莉;鸡传染性支气管炎病毒Sczy3 S1蛋白中和性单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定[D];四川农业大学;2015年

5 程林;人△42PD1特异性单克隆抗体的制备及其免疫功能的初步探讨[D];南京大学;2014年

6 王海;直肠癌上调表达蛋白eEF2单克隆抗体制备及临床应用[D];吉林大学;2016年

7 孙佳善;禽流感、新城疫和犬瘟热病毒单克隆抗体筛选策略比较及应用研究[D];东北农业大学;2016年

8 胡新韬;HIV-1B'和CRF07_BC慢性感染者中和抗体应答特征及CD4bs抗原特异性单克隆抗体分离鉴定初步研究[D];中国疾病预防控制中心;2012年

9 白宇;马γ-干扰素单克隆抗体的制备及细胞免疫评价方法的研究[D];中国农业科学院;2008年

10 余自强;抗血小板胶原受体糖蛋白VI单克隆抗体的制备和功能研究[D];苏州大学;2005年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王晓磊;流行性乙型脑炎病毒单克隆抗体的制备与prM-E蛋白抗原捕获ELISA检测方法的建立[D];中国农业科学院;2015年

2 葛新杰;NT-proBNP单克隆抗体的研制及ELISA定量检测方法的建立[D];郑州大学;2015年

3 张标;鼠抗人B7-H4受体单克隆抗体的研制及其生物学功能的初步研究[D];苏州大学;2015年

4 郑莹;CD123在儿童B系急性淋巴细胞性白血病中的表达与抗人CD123单克隆抗体的制备[D];苏州大学;2015年

5 董倩;JEV NS2B蛋白单克隆抗体的制备及其应用[D];华中农业大学;2015年

6 薛翼鹏;猪CR1-like单克隆抗体的制备及CR1-like在猪红细胞膜表面分布状态的研究[D];山西农业大学;2015年

7 缪欢;JEV PrM/M蛋白单克隆抗体的制备及JEV P3感染U251细胞蛋白质组学分析[D];华中农业大学;2015年

8 仲晓丽;犬副流感病毒单克隆抗体的制备及单链抗体蛋白的表达和活性鉴定[D];华中农业大学;2015年

9 刘静静;绵羊早孕因子单克隆抗体的制备及鉴定[D];河北农业大学;2015年

10 安莲;B型流感嗜血杆菌寡糖缀合物疫苗的免疫活性研究相关单克隆抗体的制备[D];山东大学;2015年

，

本文编号：626821