慢病毒载体在人角质形成细胞基因组中的整合位点分析

发布时间：2017-08-07 15:13

  本文关键词：慢病毒载体在人角质形成细胞基因组中的整合位点分析

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【摘要】：目的检测慢病毒载体(lentiviral vector)在人角质形成细胞基因组中的整合位点,初步分析慢病毒载体在表皮细胞基因组中的整合位点分布规律。方法以本课题组前期研究中构建的慢病毒载体感染的人永生化角质形成细胞系为研究对象,应用连接介导PCR(ligation-mediated PCR,LM-PCR)技术克隆慢病毒载体在其基因组中的整合位点序列,测序克隆片段后经在线工具GTSG-QuickMap在人类基因组上定位,从而得到整合位点。再从整合位点分布与染色体、基因及其转录起始位点的关系来分析慢病毒载体在人角质形成细胞基因组中的整合倾向性。结果对1 148个阳性转化子DNA测序及定位分析,共得到199个整合位点。与GTSG-QuickMap模拟的随机对照相比,慢病毒载体的整合频率在第4、5、15、16号染色体上、基因转录起始位点上游5 kb至50 kb范围内显示出统计学显著性差异。结论慢病毒载体倾向于整合在人角质形成细胞基因组中的基因转录起始位点附近区域,而并不倾向于整合在基因内部的整合模式。
【作者单位】： 第三军医大学西南医院全军烧伤研究所 创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;
【关键词】： 慢病毒载体 人角质形成细胞 连接介导PCR 整合位点 整合频率 整合倾向
【基金】：国家自然科学基金面上项目(81071575) 国家重点实验室Ⅰ类课题(SKLZZ200904)~~
【分类号】：R346
【正文快照】： 逆转录病毒载体是常用的外源基因整合载体,对基因治疗和转基因动物研究具有重要价值。但是,目前逆转录病毒载体尚不能将目的基因插入特定位点,当该类载体异位整合于靶细胞染色体基因组中,原病毒(provirus)与宿主(host)之间相互作用,极有可能导致转基因表达沉默及插入性诱变(in

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：635263