抗TRPC6多肽单克隆抗体的制备与鉴定

发布时间：2017-08-10 07:11

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【摘要】：目的制备抗TRPC6多肽单克降抗体,并对其免疫学和生物学特性进行鉴定。方法采用TRPC6多肽偶联血蓝蛋白(KLH)为抗原,免疫Balb/c小鼠,取血清效价高者脾细胞与Ag8.653骨髓瘤细胞进行融合。采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,以及测定单克隆抗体的特性、效价及其相对亲和力;采用单克隆抗体亚类检测试剂盒鉴定Ig亚型;并经有限稀释法克隆化培养获得杂交瘤细胞株;采用秋水仙素阻断法鉴定杂交瘤细胞株染色体。结果获得3株能稳定分泌抗TRPC6多肽的单克隆抗体,分别命名为A2、F11和H8;抗体Ig亚类均为IgG1型,染色体均在89±7条的范围内;相对亲和力结果 F11为6μg/ml,A2、H8为12.5μg/ml。结论抗TRPC6多肽单克隆抗体的成功制备,为TRPC6的免疫学检测方法的建立奠定基础。
【作者单位】： 广东药学院微生物学与免疫学教研室;广州医科大学第一附属医院呼吸疾病国家重点实验室;中山市博爱医院肾内科;
【关键词】： TRPC 多肽 单克隆抗体 杂交瘤
【基金】：中山市科技计划项目(20102A021) 华南中医药城项目(20101H014)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 瞬时受体电位阳离子通道6(transient receptorpotential channel,TRPC6)是一个含有931个氨基酸的6次跨膜蛋白,其N端和C端都位于胞内,且有1个假定的小孔区域在第5和第6跨膜区之间,并由第5和第6跨膜区构成了非选择性阳离子通道[1]。TRPC6通道研究至今已明确在人体多个部位均有

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本文编号：649388