华支睾吸虫钙调理蛋白的克隆表达、组织定位及功能的初步研究

发布时间：2017-08-10 17:21

  本文关键词：华支睾吸虫钙调理蛋白的克隆表达、组织定位及功能的初步研究

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【摘要】：目的克隆和原核表达华支睾吸虫钙调理蛋白(CsCALP),并初步研究其功能及免疫学意义。方法利用生物信息学相关软件分析CsCALP蛋白的基本理化特征和三维结构;将CsCALP基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,诱导表达CsCALP蛋白并用镍离子亲和层析柱进行纯化;通过凝胶覆盖(Gel overlay)试验鉴定纯化的CsCALP蛋白与F-Actin的结合能力;使用纯化的CsCALP蛋白免疫SD大鼠,获得抗血清,通过Western blot分析其免疫学特性;应用免疫荧光化学法观察华支睾吸虫CsCALP蛋白在成虫的定位。结果 CsCALP基因编码序列长度为1086bp,编码361个氨基酸,理论分子质量单位为39.7708ku,具有1个calponin homology结构域和5个calponin-like repeat结构域;该基因在大肠埃希菌BL21/DE3中可被表达,纯化的重组蛋白能被感染华支睾吸虫的大鼠血清识别;CsCALP蛋白主要定位于虫体富含肌肉组织,包括口、腹吸盘、咽部以及皮下肌层;Gel-overlay试验显示CsCALP蛋白能与F-Ac-tin结合。结论构建的pET-28a(+)-CsCALP能在大肠埃希菌中表达可溶性CsCALP蛋白。该蛋白具有良好的抗原活性,主要分布在华支睾吸虫成虫肌肉组织中,可能为分泌排泄抗原的组分之一。
【作者单位】： 中山大学中山医学院寄生虫学教研室;中山大学热带病防治研究教育部重点实验室;
【关键词】： 华支睾吸虫 钙调理蛋白 克隆 免疫组化
【基金】：国家973发展计划项目(No.2010CB530000) 国家自然科学基金项目(No.81101270;81171602)
【分类号】：R383.22
【正文快照】： 华支睾吸虫病是由华支睾吸虫感染引起的一种食源性寄生虫病,同时也是一种人兽共患病。其感染途径主要通过生食带有华支睾吸虫囊蚴的淡水鱼虾后,囊蚴在十二指肠脱囊,发育成熟的华支睾吸虫成虫寄居于人体和多种哺乳动物的肝脏胆管内。由于华支睾吸虫的寄生和分泌排泄抗原(ESA)

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本文编号：651963