BMP-14转染脂肪来源干细胞后与软骨细胞共培养的实验研究

发布时间：2017-08-12 11:19

  本文关键词：BMP-14转染脂肪来源干细胞后与软骨细胞共培养的实验研究

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【摘要】：目的研究BMP-14与软骨细胞共同诱导脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)向软骨细胞分化是否具有协同作用,优化软骨组织工程种子细胞来源。方法取2只雄性新西兰大白兔(体重1.5、2.0 kg)关节软骨和皮下脂肪组织,分离、培养软骨细胞和ADSCs,取第3代细胞进行实验。对ADSCs行成骨(茜素红染色)、成软骨(阿利新蓝染色)和成脂(油红O染色)诱导鉴定。测定Ad-巨细胞病毒-BMP-14-内部核糖体进入位点-人源化海肾绿色荧光蛋白1转染的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)并以其转染ADSCs。实验分为5组:A组,采用Transwell小室将BMP-14转染的ADSCs与软骨细胞共培养(1∶1);B组,采用Transwell小室将未转染的ADSCs与软骨细胞共培养(1∶1);C组,单纯BMP-14转染的ADSCs培养;D组,单纯软骨细胞培养;E组,单纯ADSCs培养。培养3周后,取细胞采用阿利新蓝法检测糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)含量,Western blot检测BMP-14和Ⅱ型胶原蛋白表达,RT-PCR检测Sox-9基因表达。结果培养细胞经鉴定提示为ADSCs。倒置荧光显微镜观察示,MOI值为150时转染效果最好。A、C组GAG含量、BMP-14和Ⅱ型胶原蛋白表达以及Sox-9基因表达均明显高于其余3组,A组高于C组,差异均有统计学意义(P0.05);B、D组均明显高于E组(P0.05),B、D组间差异均无统计学意义(P0.05)。结论 BMP-14与软骨细胞能共同诱导并促进兔ADSCs向软骨细胞分化,两者之间具有协同作用。
【作者单位】： 辽宁医学院附属第一医院整形烧伤科;辽宁医学院附属第一医院骨关节外科;
【关键词】： 软骨组织工程 脂肪来源干细胞 BMP- 软骨细胞 共培养 兔
【分类号】：R329
【正文快照】： 软骨组织因缺乏血供、细胞代谢缓慢,损伤后难以自行修复。软骨组织工程学的发展,为采用组织工程软骨修复软骨缺损带来了希望[1-3]。传统软骨组织工程研究常以自身软骨细胞作为种子细胞,存在细胞来源不足等问题,限制了其临床应用。近年来,脂肪来源干细胞(adipose-derived stem

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 邓春华;孙祥宙;高勇;罗道升;刘贵华;黄燕平;;大鼠脂肪组织来源干细胞的分离、培养和生物学特性的研究[J];中华男科学杂志;2008年02期

2 任宇;吴海青;马玉珍;仓明;王瑞;刘东军;;牛脂肪间充质干细胞的分离、培养与鉴定[J];生物工程学报;2010年12期

3 张勇;赵建宁;韩宁波;;脂肪干细胞与软骨细胞的共培养[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年24期

4 刘振宁;贾长青;韩长旭;梁峰;王俊丰;柏树令;佟浩;;生长分化因子5诱导兔脂肪干细胞成软骨细胞分化的实验研究[J];中国修复重建外科杂志;2009年04期

5 袁启龙;曾晓勇;陈亮;彭鄂军;叶章群;;兔不同部位脂肪来源干细胞体外成肌诱导能力的比较[J];中国修复重建外科杂志;2010年10期

6 张解元;袁虹;李谌;李全营;郭威;刘丹平;;腺病毒介导BMP-2联合低氧诱导因子1α突变型与单基因BMP-2分别转染BMSCs后成骨效应的比较研究[J];中国修复重建外科杂志;2012年09期

7 孙磊;綦惠;陈磊;陈海燕;江健;陶剑锋;杰永生;高新生;Peter I.Lelkes;;兔软骨细胞与骨髓基质细胞的平面共培养:两者培养比例筛选[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年27期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王威;孙丽君;;人脂肪间充质干细胞与软骨细胞接触式共培养的实验研究[J];北京医学;2012年10期

2 付柏林;郭力;;脂肪干细胞在表皮组织工程中的研究进展[J];泸州医学院学报;2009年01期

3 陈瑞宝;刘继红;饶可;潘运高;王涛;王少刚;叶章群;;大鼠脂肪干细胞体外诱导成平滑肌样细胞的研究[J];中华男科学杂志;2009年05期

4 高勇;孙祥宙;邓春华;刘贵华;黄燕平;廖勇彬;;大鼠脂肪干细胞体外诱导为神经元样细胞的研究[J];中国男科学杂志;2009年02期

5 白轶;陈亮;;兔脂肪源干细胞与牙周膜成纤维细胞共培养的实验研究[J];临床口腔医学杂志;2012年10期

6 聂绪强;陈怀红;唐宁;卞卡;;脂肪干细胞的共培养及其分化应用概述[J];生物工程学报;2011年08期

7 ;Transplanted adipose-derived stem cells delay D-galactose-induced aging in rats[J];Neural Regeneration Research;2011年34期

8 张月东;张开刚;;脂肪干细胞在骨组织工程中的应用研究[J];社区医学杂志;2011年10期

9 詹兴旺;姜艳;王文良;;细胞共培养在组织工程研究中的应用及价值[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年20期

10 任逸众;韩长旭;;脂肪干细胞的体外诱导与分化[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年32期

中国博士学位论文全文数据库 前6条

1 萨伊德;碳纳米纤维支架与兔脂肪干细胞的体外相容性研究[D];华中科技大学;2011年

2 张勇;脂肪干细胞直接修复兔膝关节软骨损伤的实验研究[D];第二军医大学;2009年

3 杨浩;脂肪基质干细胞复合SIS治疗家兔生长板缺损的实验研究[D];昆明医学院;2010年

4 景成伟;兔脂肪干细胞向髓核样细胞分化的实验研究[D];天津医科大学;2012年

5 杨靓;脂肪干细胞来源施万细胞在大鼠脑损伤中的应用[D];中南大学;2011年

6 闻重秋;脂肪源干细胞移植治疗骨质疏松及其成骨分化蛋白质谱构建[D];南方医科大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 沈需;ADSCs对人胆管瘢痕成纤维细胞TGF-β/smad信号通路的作用及机制[D];昆明医学院;2011年

2 马继中;羊膜负载脂肪来源干细胞修复大鼠皮肤缺损的实验研究[D];南昌大学;2011年

3 谢莹;大鼠脂肪源性干细胞分离培养及与成纤纤细胞间接共培养的实实实究[D];广州医学院;2010年

4 陈瑞宝;大鼠脂肪干细胞体外诱导成平滑肌样细胞的实验研究[D];华中科技大学;2010年

5 夏天;生长分化因子5诱导下自组装培养形成软骨组织的实验研究[D];华中科技大学;2010年

6 邵淑敏;猪APC1和APC2基因的分离、鉴定及其功能的初步研究[D];华中农业大学;2011年

7 张月东;小肠粘膜下层复合成骨诱导的脂肪干细胞体内成骨修复骨缺损的实验研究[D];泰山医学院;2011年

8 赵强;人脂肪来源干细胞的分离、培养及生物学特性的实验研究[D];吉林大学;2011年

9 陶晖;异体脂肪源干细胞移植对糖皮质激素致骨质疏松大鼠的影响[D];南方医科大学;2011年

10 杨靓;脂肪干细胞来源施万细胞移植治疗大鼠运动皮层损伤模型[D];中南大学;2008年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张国华;屈长青;杨公社;;猪脂肪间充质干细胞的分离培养及其成脂分化[J];动物学报;2006年05期

2 王珍;徐根波;;骨髓间质干细胞及其临床应用的研究进展[J];国外医学(内科学分册);2006年02期

3 陆伟;金岩;张勇杰;;SD大鼠脂肪组织来源干细胞体外生物学特性研究[J];临床口腔医学杂志;2006年07期

4 刘风华;杨冬梓;王沂峰;梁晓萍;彭文明;曹长安;陈系古;郭忠敏;;骨髓间充质干细胞向“类精子”分化的动物实验鉴定[J];中华男科学杂志;2007年04期

5 刘玉梅;张自强;杨雪峰;邓雯;李梦云;;兔脂肪间充质干细胞分离培养及鉴定[J];西北农业学报;2009年05期

6 单秀莉;王青;林志勇;孙鸿义;林秀娟;陈鲁沂;;大鼠脂肪干细胞体外定向诱导分化为成骨细胞的研究[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2006年08期

7 杨立业,刘相名,孙兵,惠国桢,费俭,郭礼和;Adipose tissue-derived stromal cells express neuronal phenotypes[J];Chinese Medical Journal;2004年03期

8 周广东,苗春雷,王晓云,刘天一,崔磊,刘伟,曹谊林;软骨细胞与骨髓基质细胞共培养体外软骨形成的实验研究[J];中华医学杂志;2004年20期

9 黄翔;罗静聪;廖勇;屈艺;杨志明;;小肠黏膜下层修复尿道的实验研究[J];中国修复重建外科杂志;2006年03期

10 林在俊;朱振安;汤亭亭;戴\戎;楼觉人;孟凡琳;;HA复合rhBMP-2转染的BMSCs对羊胫骨延长骨愈合的影响[J];中国修复重建外科杂志;2008年02期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 鞠洪斌;大鼠脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞成骨分化比较的体外研究[D];中南大学;2006年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 孙磊;綦惠;陈磊;陈海燕;江健;陶剑锋;杰永生;高新生;Peter I.Lelkes;;兔软骨细胞与骨髓基质细胞的平面共培养:两者培养比例筛选[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年27期

2 邵乐南,程鹏,马绪臣,陈卫民;雌二醇对兔髁突软骨细胞增殖与分化的影响[J];同济医科大学学报;2000年06期

3 宋鸿;陈炜;;兔软骨细胞的分离培养及其生物学特征的检测[J];遵义医学院学报;2008年06期

4 任保;李慧芳;左喜爱;黄殊变;于建红;;兔关节软骨细胞的原代培养和去分化现象[J];河北北方学院学报(医学版);2010年02期

5 李凯;卫小春;徐刚;邵越峰;李鹏翠;丁娟;杨述华;;细胞高密度培养促进兔关节软骨细胞糖胺多糖合成作用研究[J];山西医科大学学报;2009年04期

6 方锐;艾力江·阿斯拉;卢勇;孟庆才;张凯;卢艳丽;;兔骨性关节炎模型构建及早中晚期的特点[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年07期

7 彭智,宋跃明,王定国,刘立岷,丁永利;外消旋聚乳酸与软骨细胞体外培养的实验研究[J];生物医学工程学杂志;2005年03期

8 孙明林;朱雷;吕丹;;Ⅱ型胶原蛋白对兔去分化软骨细胞再分化的作用[J];中国修复重建外科杂志;2010年10期

9 俞猛;于方;付胜良;;兔骨髓间充质干细胞体外培养定向诱导分化为软骨细胞[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年27期

10 卫小春;软骨组织工程种子细胞的研究进展[J];中国矫形外科杂志;2003年18期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 赵阳;柳子星;王颖;张惠珍;王树军;葛海良;;大鼠IL—10真核表达载体在软骨细胞中的瞬时表达[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

2 任宏造;;软骨细胞的超生结构病理[A];第六次全国电子显微学会议论文摘要集[C];1990年

3 张艳;柴岗;刘伟;周广东;崔磊;曹谊林;;体外培养过程中去分化的人软骨细胞基因表达谱的变化[A];第四届华东六省一市整形外科学术会议暨2007年浙江省整形、美容学术会议论文汇编[C];2007年

4 李建华;黄建荣;康奕飞;许继德;涂永生;;体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的研究[A];中南地区第六届生理学学术会议论文摘要汇编[C];2004年

5 马钰;李青;赵大庆;王淑芳;李望舟;闵婕;谷雨;;脂肪基质干细胞的分离培养及其作为软骨种子细胞的研究[A];中华医学会病理学分会2007年学术年会暨第九届全国病理大会论文汇编[C];2007年

6 颉玉欣;张进贵;郭晓华;赵萌;李亚;刘燕;;鼠剑突软骨细胞的体外分离与培养[A];河北省免疫学会第5次会员代表暨学术大会论文摘要集[C];2006年

7 徐铭;陈淑萍;安肖霞;温小红;;改良兔肺原位保存缺血再灌注模型[A];2008年第七次华东六省一市麻醉学学术会议暨浙江省麻醉学术年会论文汇编（下册）[C];2008年

8 邢国胜;;成骨细胞、破骨细胞、软骨细胞体外培养技术及其在骨伤科的应用[A];第五次全国中西医结合骨伤科学术交流暨中国中西医结合学会骨伤科专业委员会换届大会文集[C];2000年

9 褚朝顺;苗毅;奚春华;平定;王杰;吕朋华;Yicheng Ni;Gay Marchal;;兔局限性肿瘤模型的建立[A];中华医学会第10届全国胰腺外科学术研讨会论文汇编[C];2004年

10 赵大庆;李青;陈文弦;陈广生;;体外保存人鼻中隔软骨活性的实验研究[A];中华医学会病理学分会2007年学术年会暨第九届全国病理大会论文汇编[C];2007年

中国重要报纸全文数据库 前6条

1 张中桥;西京医院建立人视网膜色素上皮细胞老化模型[N];中国医药报;2006年

2 本报记者 王丹　通讯员 罗国金;组织工程软骨 关节修复的点睛之笔[N];健康报;2011年

3 ;类肝素硫酸对骨骼的形成具有重要作用[N];光明日报;2002年

4 杨骏;人类在动物身上获病毒抗体[N];人民日报;2004年

5 冯丽玲；曾庆平;科学家获得转基因青蒿植株[N];中国医药报;2005年

6 记者 李鹏;“人耳鼠”造假风波[N];北京科技报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 李元城;微流控芯片上胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对兔关节软骨细胞体外增殖的影响[D];大连医科大学;2010年

2 祁军;大鼠骺板软骨细胞体外三维培养及细胞响应力学信号的初步机制[D];华中科技大学;2011年

3 黄定强;骨髓间充质干细胞定向诱导分化的实验研究[D];四川大学;2004年

4 李真;构建组织工程软骨中机械刺激的作用研究[D];浙江大学;2010年

5 何清义;软骨组织工程的种子细胞研究—人关节软骨细胞的永生化及其生物学特性[D];第三军医大学;2002年

6 郑希福;仿生PLGA/软骨ECM复合取向支架的制备及其软骨组织工程的实验研究[D];大连医科大学;2011年

7 王华;剪切力对体外培养人软骨细胞代谢的影响[D];武汉大学;2011年

8 刘瑾春;诱导骨髓间充质干细胞软骨定向分化的关键因子筛选及体外诱导方案优化[D];北京协和医学院;2011年

9 梁锦前;瘦素对于人OA软骨细胞RhoA/LIMK1/Cofilin细胞骨架调控通路的作用[D];中国协和医科大学;2010年

10 周英晋;共培养诱导骨髓间充质干细胞向leydig细胞分化的研究[D];第二军医大学;2011年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王结果;异种关节软骨与MSCs体外共同培养的实验研究[D];南京医科大学;2010年

2 郭小磊;共培养诱导骨髓间充质干细胞向成软骨细胞分化及初步体内比较两种不同规格PLGA材料修复骨软骨缺损效果的实验研究[D];南方医科大学;2012年

3 毕经锋;BMP-2对骨髓基质干细胞与软骨细胞共培养向软骨细胞分化的影响[D];辽宁医学院;2012年

4 邱丽燕;人骨髓间充质干细胞的分离、培养及向软骨细胞方向的诱导[D];浙江大学;2003年

5 马进峰;软骨生长因子（CDGF）对培养兔软骨细胞的作用及其与IGF-I的协同效果[D];青岛大学;2001年

6 胡翰生;细胞因子、生长激素和培养基对体外培养的兔关节软骨细胞影响的实验研究[D];南京医科大学;2004年

7 朱雷;滚压载荷生物反应器及不同状态软骨细胞对兔骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的作用[D];河北医科大学;2011年

8 江祺川;BMP-2与b-FGF对大鼠关节软骨细胞体外增殖和分化的作用[D];辽宁医学院;2011年

9 徐磊;基于共培养体系考察间充质干细胞调控关节软骨表型的研究[D];华东理工大学;2012年

10 丁海蛟;TGF-β_1作用下成年兔关节软骨细胞的体外培养[D];中国医科大学;2004年

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