高氧肺损伤形成过程中小窝蛋白-1、TGF-β1表达关系的体内外研究

发布时间：2017-08-12 16:33

  本文关键词：高氧肺损伤形成过程中小窝蛋白-1、TGF-β1表达关系的体内外研究

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【摘要】：目的：通过建立高氧肺损伤动物模型和体外细胞培养的方法,从体内和体外两方面来研究小窝蛋白-1(Caveolin-1)和TGF-β1与高氧肺损伤纤维化之间的关系,以探讨高氧肺损伤纤维化的发病机制。 方法： 1.体内实验将剖宫术取出孕21d大鼠作为早产鼠为研究对象,制成早产鼠高氧肺损伤模型。实验将早产大鼠分为两个组：对照组(n=15)、实验组(n=15)。两组分别于暴露满1、3、7d时随机选取早产鼠5只麻醉后处死,行肺灌洗后,将肺组织完整取出后制成石蜡切片,应用苏木精-伊红染色观察不同时间点肺组织病理改变,在光镜下进行肺组织纤维化评分,并采用免疫组织化学SP法(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法)检测不同时间点肺组织小窝蛋白-1、TGF-β1的表达部位和强度。 2.体外实验以人肺上皮细胞系A549为模型细胞,建立高氧A549细胞损伤模型。实验将细胞随机分为对照组和实验组。对照组置于5%CO2培养箱中；实验组置于5%CO2-95%O2的混合气中培养。两组分别于处理后12、24、48h收集细胞检测如下指标：普通光学显微镜下观察细胞形态学变化；采用免疫荧光双染检测小窝蛋白-1、TGF-β1表达的相关性,用激光扫描共聚焦显微镜观察。 结果： 1.体内实验结果(1)肺组织病理改变：对照组1、3、7d比较,肺组织发育逐渐成熟,肺泡结构逐渐规整,大小均匀一致,肺泡间隔变薄,各时间点肺组织形态无明显改变。与对照组比较,高氧暴露第1d,无较大差异；高氧暴露第3d,肺泡腔内有少许红细胞渗出及肺泡间隔有以中性粒细胞为主的浸润；高氧暴露第7d,肺损伤较重,可见较多的炎性细胞和红细胞,肺发育受阻,肺组织结构紊乱,出现肺纤维化倾向。(2)肺组织小窝蛋白-1、TGF-β1的表达：小窝蛋白-1在对照组早产大鼠肺组织中均有较高水平表达。与对照组相比,实验组肺组织Caveolin-1的表达出现降低,在3d,7d明显降低,差异有显著性(31.21±4.04 vs 46.20±3.50；19.94±5.58 vs 43.26±4.12,P0.05),其与纤维化评分呈负相关(r=-0.88、-0.93,P0.05)；TGF-β1在对照组早产大鼠肺组织中均有较低水平表达。与对照组相比,实验组肺组织TGF-β1的表达出现升高,在3d,7d明显升高,与对照组比较差异有显著性(20.45±2.75vs16.53±1.69；35.78±2.28vs 17.05±3.42,P0.05)其与纤维化评分呈正相关(r=0.82、0.87,P0.05)。相同时间点小窝蛋白-1的阳性表达与TGF-β1的阳性表达有负相关,以对照组,实验组1d、7d最显著(r=-0.91,-0.86,-0.63,-0.82,P0.05)。 2.体外实验结果(1)A549细胞形态变化：倒置相差显微镜下观察,对照组A549细胞贴壁良好,为扁圆的多角形,细胞排列紧密,连接成片,胞体明亮,数量多,悬浮细胞较少,呈现良好的生长状态。实验组细胞受损明显,由典型的扁圆多角形细胞变为圆形或椭圆形,细胞间空隙加大,连接松散,活细胞数量明显降低,悬浮细胞明显增多,以通高氧48 h最明显。(2)免疫荧光双染结果显示：小窝蛋白-1免疫荧光阳性细胞呈红色荧光,TGF-β1免疫荧光阳性细胞呈绿色荧光,两者合成显示黄色荧光。在对照组,小窝蛋白-1的高表达伴随着TGF-β1的低表达(44.25±3.23 vs10.18±2.74)；在实验组,随着通氧时间的延长,小窝蛋白-1表达逐渐减弱,TGF-β1表达逐渐增强(12h：35.25±1.88 vs 17.32±1.50；24h：20.75±1.68 vs 26.51±1.82；48h：9.86±2.80 vs 41.94±4.47)。相同时间点小窝蛋白-1的阳性表达与TGF-β1的阳性表达有负相关,以对照组、实验组48h最显著(r=-0.91,-0.62,-0.53,-0.88,P0.05)。 结论：在高氧肺损伤的发生发展过程中,Caveolin-1表达显著性减少,TGF-β1表达持续性增多,两者呈拮抗关系,提示Caveolin-1可能通过下调TGF-β1的产生而具有抗纤维化能力。
【关键词】：高氧肺损伤 小窝蛋白-1 TGF-β1 早产鼠 纤维化
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R363
【目录】：

• 1 高氧肺损伤形成过程中小窝蛋白-1、TGF-β1表达关系的体内外研究4-49
• 1.1 中文摘要4-7
• 1.2 英文摘要7-11
• 1.3 前言11-13
• 1.4 材料与方法13-21
• 1.5 结果21-27
• 1.6 讨论27-35
• 1.7 结论35-36
• 1.8 参考文献36-42
• 1.9 英汉缩略词对照表42-49
• 2 致谢49-50
• 3 炎症反应与高氧肺损伤(综述)50-61
• 参考文献57-61
• 4 在读书期刊发表的论文复印件61-62
• 附件62-72

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