人源醛酮还原酶7A2融合蛋白的纯化及其对苯代谢产物的催化活性

发布时间：2017-08-12 20:14

  本文关键词：人源醛酮还原酶7A2融合蛋白的纯化及其对苯代谢产物的催化活性

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【摘要】：目的使用FPLC系统纯化人源醛酮还原酶(AKR)7A2融合蛋白,并检测纯化的AKR7A2蛋白对苯的代谢产物的催化活性。方法将含有His-AKR7A2的重组质粒转化至BL21大肠杆菌,通过IPTG诱导AKR7A2融合蛋白的大量表达;利用FPLC系统通过HiTrap亲和柱和G25 Sephadex凝胶色谱柱纯化AKR7A2融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot鉴定。采用酶活性实验检测纯化的重组AKR7A2蛋白对苯甲醛、双苯醌和反向,反向-2,4-二烯-1,6-己二酮(MUC)的底物特异性。结果使用FPLC系统通过两步纯化法成功获得重组的His-AKR7A2融合蛋白,纯度高达98%。酶活性实验结果显示:重组AKR7A2蛋白对苯甲醛有中等亲和力,对MUC亲和力较高,对双苯醌的亲和力较低。结论成功纯化了重组人源AKR7A2蛋白,并检测了其对3种苯代谢产物的底物特异性,AKR很可能在苯的代谢途径中扮演重要角色。
【作者单位】： 中国医科大学药学院生物制药教研室;中国医科大学附属第一医院药学部;沈阳军区总医院医学情报科;
【关键词】： 醛酮还原酶 蛋白纯化 底物特异性
【基金】：留学人员科技活动择优资助项目(人社厅函[2012]258) 辽宁省科学技术计划项目(2012225021)
【分类号】：R341
【正文快照】： 苯是环境污染物中广泛存在的一种致癌物质,可引起非淋巴细胞性白血病等血液疾病,低剂量的苯还能引起白细胞及血小板减少[1]。苯的毒性大部分来源于它的代谢产物。苯代谢产物主要通过2种途径产生:一种是通过对苯环的修饰,如苯甲醛和对苯醌,一种是通过开环反应,如反向,反向-2,4，

本文编号：663420