诱导人脐带MSCs分化为胰岛样细胞团的促成熟方案及机制

发布时间：2017-08-13 06:12

  本文关键词：诱导人脐带MSCs分化为胰岛样细胞团的促成熟方案及机制

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【摘要】：目的:通过各种生物化学制剂的不同组合在体外诱导人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)向胰岛样细胞团(ILCs)分化,筛选出能表达激素原转化酶(PC)1和PC2的促成熟方案。方法:用胶原酶Ⅱ消化、过滤离心和不完全消化传代的方法从人的完整脐带中分离和纯化hUC-MSCs,流式细胞术、RT-PCR和免疫细胞荧光技术检测其干细胞标志物。选用A、B、C 3种方案诱导hUC-MSCs向ILCs分化:方案A为含10μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、10μg/L表皮生长因子(EGF)、10 mg/L银杏提取液(GBE)及2%胎牛血清(FCS)的高糖培养基IM-DM;在方案A基础上加入10μg/L尼克酰胺为方案B;在方案B基础上加入10μg/L肝细胞生长因子(HGF)为方案C。在hUC-MSCs诱导前后,通过倒置显微镜观察其形态变化,采用RT-PCR、qPCR和Western blotting检测胰岛相关mRNA和蛋白,特别是PC1和PC2的表达情况。结果:(1)细胞形态、表面相关抗原、干细胞特异基因的表达等情况表明hUC-MSCs可以从人脐带中被成功地分离和纯化;hUC-MSCs普遍表达nestin,轻微表达Isl1。(2)RT-PCR检测发现方案A诱导的ILCs有Glut-2和MafA mRNA表达,方案B诱导的ILCs有Glut-2、MafA、Nkx6.1和PC2mRNA表达,方案C诱导的ILCs有Glut-2、MafA、Nkx6.1、PC2、Ngn3、Pdx1、PC1和胰岛素mRNA表达,提示A、B和C3种方案诱导的细胞有逐渐成熟的趋势。qPCR检测也证实了PC1 mRNA仅在方案C中有表达,PC2 mRNA在方案B和方案C中均有表达,但方案C中PC2 mRNA的表达量显著高于方案B(P0.01);Western blotting结果也表明PC1蛋白只在方案C中有表达;PC2酶原(ProPC2)与PC2在方案B和方案C中都有表达,且它们在方案C中的表达量均显著高于方案B(P0.01)。结论:(1)hUC-MSCs具有向胰岛祖细胞或胰岛细胞分化的潜能;(2)方案C中尼克酰胺和HGF可促进hUC-MSCs向ILCs分化,使ILCs表达PC1并上调PC2;相对于方案A和B,方案C是一种促成熟方案。
【作者单位】： 暨南大学医学院生理学系;
【关键词】： 脐带 间充质干细胞 激素原转化酶 胰岛样细胞团
【基金】：广东省医学科研基金(No.A2012325) 中央高校基本科研业务费专项资金(No.21612427) 广东省科技计划(No.2012B060300020) 暨南大学国家级大学生创新创业训练计划项目(No.1210559028)
【分类号】：R329
【正文快照】： 间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是来源于中胚层的一类多功能干细胞,可以分化成具有外胚层、中胚层或内胚层特征的细胞[1-2]。大量研究表明人脐带间充质干细胞(mesenchymal stemcells derived from human umbilical cord,hUC-MSCs)能分化为成脂肪细胞、软骨细胞、

【参考文献】

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1 李杏肖;李晓红;林秋雄;肖定璋;刘晓颖;单志新;朱杰宁;麦丽萍;夏慧苏;余细勇;;转染isl1基因促进骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化[J];中国病理生理杂志;2012年01期

2 王舒阳;韩瑞;张广宇;王翠琴;彭越;鲁晶晶;彭涛;贾延R，

本文编号：665782