肠上皮细胞来源的整合素αVβ6对肠道树突状细胞TGF-β1表达的影响

发布时间：2017-08-14 04:12

  本文关键词：肠上皮细胞来源的整合素αVβ6对肠道树突状细胞TGF-β1表达的影响

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【摘要】：背景和目的 在过去的数十年中,食物过敏的患病率在全世界显著增加,最近的研究报道,4%至8%的儿童和3%至4%的成人曾发生过食物过敏,而且食物过敏的发病率仍在增长。过敏性疾病影响着人类健康和社会经济的发展,目前对于过敏性疾病的治疗及预防方法仍然不能令人满意的,而且其发病机制还有待进一步了解。 食物过敏是一种免疫反应,肠道口服耐受受损及Th2细胞的极化是食物过敏的主要发病机制。研究发现口服耐受是多种机制共同作用的结果：包括T细胞克隆无能和缺失,以及调节性T细胞(Treg)产生特异性的抗原。耐受性树突状细胞(tolerance dendritic cell, TolDC)在启动免疫反应和维持免疫耐受性中发挥了关键作用,其通过诱导Foxp3+调节性T细胞(Treg)来抑制免疫反应从而高表达IL-10、TGF-β、视黄酸、吲哚-2,3-双加氧酶与维生素D,低表达MHC II类(MHCII)和共刺激分子。TolDC在Treg产生和口服耐受中起关键作用。肠道是表面积最大的免疫器官,而肠上皮细胞(IEC)处于机体与外界抗原接触的第一线。其表面表达的一系列细胞分子,通过限制肠腔细菌和食物过敏原的侵入,在维护肠道内环境稳定中起着至关重要的作用。IEC可以促使TolDC的分化,而且与身体其他器官相比,肠道固有层拥有更多的TolDC. 转化生长因子β (TGF-p)作为二聚体多肽生长因子家族的成员,参与细胞功能调节,增殖,分化和迁移。在TGF-β已知的三个异构体(TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3)中,TGF-β1主要在免疫系统中表达,TGF-β1主要与其受体结合来调节免疫功能；以非活化的状态存在,被激活后才能发挥其潜在的复杂的生物学作用。有研究显示整合素αVβ6(integrinaVβ6)在TGF-β1的活化中扮演重要的作用。αVβ6是由α和β亚基组成的细胞粘附蛋白,其在健康成人的上皮细胞中不表达,但在炎症,伤口修复和癌症中表达升高。aVβ6通过与非活化TGF-β羧基末端的氨基酸序列结合,促使TGF-β的活化。卵清蛋白(ovalbumin,O VA)因具有抗原性,常常被用于食物抗原模型的研究。 我们既往研究中,通过给予小鼠OVA和佐剂建立了经典的小鼠肠道OVA过敏模型。另有研究显示,通过灌胃只给予OVA则能够诱导建立小鼠肠道食物抗原耐受模型,其机制有待进一步研究。我们既往通过体外细胞培养实验研究显示,肠道上皮细胞来源外泌体中含有整合素αVβ6及食物抗原,能够增加骨髓来源树突状细胞中TGF-β的表达,并使之转变为TolDC,但整合素αVβ6在肠道TolDC产生中是否具有重要作用仍有待进一步研究。本研究中,我们将通过体内试验,首先建立小鼠OVA耐受模型,并进一步通过抗整合素αVβ6干预,评价肠道黏膜TolDC的产生。抗αVβ6抗体能够阻断OVA耐受小鼠肠道中TolDC的产生。肠上皮来源整合素αVβ6能够增加DC中TGF-β1的表达,并使其转变为TolDC,从而在肠道免疫耐受中起重要作用,本研究为食物过敏性疾病发病机制的研究提供了新的理论依据。 方法 无菌Balb/c雄性/雌性小鼠30只,随机分为3组：空白对照组、OVA组、OVA+抗αVβ6抗体组。OVA组OVA灌胃(空白对照组生理盐水灌胃为对照),OVA+抗αVβ6抗体组腹腔注射抗αVβ6抗体,30min后OVA灌胃,方法同OVA组。取空肠分离固有层单核细胞(LPMC),免疫磁珠分离DC细胞。流式细胞仪测定TolDC(CD11c+TGF-β1+)的比率变化。免疫荧光双染法(IF)检测空肠CDllc+与TGF-β1+分布情况。Western-bolt法测定TGF-β1蛋白水平变化。实验数据分析采用SPSS17.0, p0.05有统计学差异。 结果 1.分离各组小鼠肠道LPMC,免疫磁珠分选肠道DC细胞,经抗CD11c抗体及TGF-β1抗体染色,流式细胞仪分析：与空白对照组相比,OVA组肠道LPMC中的TGF-β1+百分率明显增加(p0.05)；而OVA+抗αVβ6抗体组TGF-β1+百分率明显降低(p0.05)。与OVA组相比,OVA+抗αVβ6抗体组TGF-β1+百分率明显降低(p0.05)。 2.OVA灌胃后,OVA组小鼠空肠组织中TolDC细胞分布计数为(13.0±1.760),较空白对照组(4.9±1.66)显著增加(p0.05),该组中CD11c+DC细胞分布计数为(5.0±1.83),较空白对照组(8.1±±1.91)显著减少(p0.05)；OVA+抗αVβ6抗体组中ToIDC细胞分布计数为(3.2±1.37),较空白对照组(4.9-±1.66)无明显变化(p0.05),该组中CD11c+DC细胞计数为(11.0±2.16),较空白对照组(8.1±±1.91)无明显变化(p0.05)。 3.与空白对照组相比(0.129+0.069),OVA组(0.236±0.049)TGF-β1表达显著增高(p0.05)；OVA+抗αVβ6抗体组(0.1744±0.075)表达显著降低(p0.05)。与OVA组相比,OVA+抗αVβ6抗体组(0.1744±0.075)TGF-β1表达显著降低(P0.05) 结论 1.肠道粘膜固有层单核细胞(LPMC)来源CDllc阳性细胞经流式细胞仪检测后发现,CDllc+和TGF-β1+的表达增高；抗αVβ6抗体拮抗后,TGF-β1+不能活化,TGF-β1+表达降低。 2.OVA刺激后,空肠TGF-β1+细胞分布密度增加,TolDC细胞增多；抗αVβ6抗体拮抗后,TolDC细胞密度降低。OVA刺激后,TGF-β1的蛋白表达量上升；抗αVβ6抗体拮抗后,TGF-β1的蛋白表达量下降。提示TGF-β1的改变受到αVβ6的调节。 3.肠上皮来源整合素αVβ6能够增加DC中TGF-β1的表达,并使其转变为TolDC,从而在肠道免疫耐受中起重要作用。
【关键词】：食物过敏 αVβ6 TGF-β1 树突状细胞 CD11c
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 前言12-15
• 材料与方法15-26
• 结果26-29
• 讨论29-35
• 结论35-36
• 附图与表36-41
• 参考文献41-45
• 综述45-60
• 参考文献55-60
• 中英文缩略词对照表60-61
• 个人简历、在校期间发表的学术论文61-62
• 致谢62

【参考文献】

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1 孔磊;孙景武;张彩虹;;整合素αvβ6和MMP-9在胃癌中表达及其与胃癌病理生物学特征的关系[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年01期

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本文编号：670673