A20人工锌指转录因子真核载体的构建及其对内皮细胞炎症反应的影响

发布时间：2017-08-14 12:07

  本文关键词：A20人工锌指转录因子真核载体的构建及其对内皮细胞炎症反应的影响

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【摘要】：目的观察A20基因的人工锌指转录因子(zinc finger-artificial transcription factor,ZF-ATF)对内源性A20基因及内皮细胞炎症反应的影响。方法根据人A20基因的序列,设计出其ZF-ATF,合成靶序列Oligo DNA,退火形成双链DNA,与通过BamHⅠ和KpnⅠ酶切后的载体连接产生ZF-ATF真核载体,质粒转化感受态细菌DH5α,筛选阳性克隆,提取质粒,限制性内切酶酶切鉴定,鉴定阳性克隆进行测序。质粒DNA转染人脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendothelial cell,HUVEC),通过Western blot检测A20蛋白的表达,用脂多糖(LPS)诱导HUVEC细胞产生炎症反应,利用Western blot检测NF-κB p65的表达情况,利用ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-8等的水平。结果限制性内切酶酶切鉴定与DNA测序证实合成的含ATF的真核载体寡核苷酸链插入正确,Western blot证实转染HUVEC后A20蛋白表达显著增加。ELISA法检测结果表明,在LPS刺激后,空载体组及空白组细胞因子IL-8、IL-6、TNF-α表达均明显上调,而ZF-ATF转染组没有明显上调,与空载体组及空白组比较,有统计学差异(P0.05,P0.01);Western blot证实在LPS刺激后ZF-ATF转染组NF-κB p65的表达(19.8±4.5)较空载体组(90.2±5.9)及空白组(96.3±3.3)显著下调(P0.01)。结论成功构建人工锌指转录因子真核表达载体,且能够启动内源性A20的稳定表达,并发挥其抗炎等作用。
【作者单位】： 第三军医大学西南医院神经内科;
【关键词】： A 人工转录因子 抗炎作用
【基金】：国家自然科学基金(81000671) 重庆市自然科学基金(CSTC2010BB5190)~~
【分类号】：R392
【正文快照】： 缺血性脑血管病是常见病、多发病,致残率与病死率均高。微创的血管内介入治疗应用于缺血性脑血管病的二级预防,显著降低了卒中的发生率。但是球囊扩张、支架植入等经皮血管成形术(percutaneous trans-luminal angioplasty,PTA)对局部血管造成的损伤以及过度修复反应———再

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本文编号：672568