HBx-shRNA重组腺病毒的构建及功能鉴定

发布时间：2017-08-18 23:09

  本文关键词：HBx-shRNA重组腺病毒的构建及功能鉴定

  更多相关文章： 重组腺病毒 乙型肝炎病毒X蛋白 shRNA 肝细胞肝癌

【摘要】：目的:构建携带绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)标签的乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)特异性shRNA重组腺病毒,并对其干扰效果进行鉴定。方法:将前期构建的真核表达载体pGenesil-1-HBx-shRNA和pGenesil-1-Scramble sequence的表达启动子U6连同shRNA亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,构建pAdTrack-CMV-U6-HBxshRNA和对照pAdTrack-CMV-U6-Scramble sequence穿梭质粒;酶切及DNA测序鉴定后,经PmeⅠ线性化后转化入感受态AdEasier细菌,获得重组腺病毒质粒pAd-U6-HBx-shRNA和pAd-U6-Scramble sequence,PacⅠ酶切后转染AD293细胞获得重组腺病毒Ad-U6-HBx-shRNA和Ad-U6-Scramble sequence;扩增病毒,测定滴度;以RT-PCR和real-time PCR鉴定重组腺病毒Ad-U6-HBx-shRNA对HBx的干扰效果。结果:酶切鉴定得到阳性pAd-U6-HBx-shRNA和pAd-U6-Scramble sequence重组质粒;转染到AD293细胞并包装成功;RT-PCR以及real-time PCR表明,重组腺病毒Ad-U6-HBx-shRNA携带的干扰片段能够明显干扰HBx表达(P=0.01)。结论:成功构建了HBx特异性shRNA重组腺病毒Ad-U6-HBx-shRNA,它能抑制HepG2.2.15细胞中的HBx的表达,为研究HBx作为肝癌基因治疗作用的一个靶点以及机制奠定基础。
【作者单位】： 重庆医科大学附属第一医院健康体检部;重庆医科大学教育部感染性疾病分子生物学重点实验室;
【关键词】： 重组腺病毒 乙型肝炎病毒X蛋白 shRNA 肝细胞肝癌
【基金】：重庆市渝中区软科学研究资助项目(编号:20110213) 国家临床重点专科护理建设资助项目(编号:财社【2010】305号)
【分类号】：R373
【正文快照】： 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的感染被认为是导致肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的重要因素之一[1]。HBV X蛋白(hepatitis Bvirus X protein,HBx)是由HBV基因组编码的17 kD蛋白,大量研究表明HBx与HCC的发生与发展有重要的联系,因此对HBx的研究成为治疗HCC

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 万涛;张小花;张磊;田园园;丁世家;汤华;;HBV对肝癌细胞中AKR1C1基因表达的影响[J];第三军医大学学报;2010年03期

2 陈启斌;荚卫东;;RNA干扰及其在肝癌治疗中的研究进展[J];实用肝脏病杂志;2012年01期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 杨雨晗;邓缅;;Caveolin-1的低表达与乙型肝炎病毒感染相关肝细胞癌的关系研究[J];第三军医大学学报;2011年07期

2 罗强;苏怀彬;梁盼盼;袁作为;张文露;黄爱龙;胡接力;;1.1倍全长HBV基因组克隆转染细胞系的建立[J];第三军医大学学报;2011年16期

3 董晋豫;王秦;梁勤东;李武县;马婷婷;熊海玉;李紫微;涂植光;;环氧化酶-2基因shRNA重组腺病毒的构建及鉴定[J];中国生物制品学杂志;2013年08期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 严敏;Lmx1α和NTN定向诱导人脐带间充质干细胞为DA能神经元及靶向性治疗恒河猴PD模型的研究[D];北京协和医学院;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前3条

1 白志勋;TGF-β1/Smads/ILK信号通路在环孢素诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用[D];遵义医学院;2013年

2 朱志鹏;门静脉注射小鼠Hepcidin基因特异性RNAi腺病毒的方法研究[D];浙江大学;2013年

3 李凯;在肝癌细胞中乙型肝炎病毒X蛋白通过转录因子NF-Y上调AKR1C1基因的表达[D];重庆医科大学;2013年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 陆彬彬;殷咏梅;王朝霞;王腾;德伟;束永前;;人血管内皮生长因子shRNA真核表达载体对肝癌细胞系SMMC-7721的增殖影响[J];南京医科大学学报(自然科学版);2006年06期

2 檀英霞;刘志玄;李素波;田曙光;卞丽红;宫锋;;RNA干扰对肝素酶在肝癌细胞中表达及其肿瘤生长抑制的作用[J];世界华人消化杂志;2008年02期

3 李俊;孙倍成;邓蕾;张勇;席力森;高云;王学浩;;针对人IKKα、IKKβ基因RNA干扰慢病毒质粒的构建及其对人肝癌细胞生长的影响[J];江苏医药;2009年01期

4 朱晓群;叶青海;雷科峰;陈洁;钦伦秀;;特异性小干扰性RNA降低骨桥蛋白基因表达对肝癌细胞侵袭性的影响[J];中华肿瘤杂志;2006年06期

5 陈钟;陈小建;常仁安;;RNA干扰PLK1基因表达对肝癌细胞增殖的影响[J];中国普通外科杂志;2010年09期

6 赵岳;徐凯成;张燕菊;李中辉;刘伟;;RNA干扰抑制人肝癌细胞N-ras基因表达的研究[J];中国实验诊断学;2010年02期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 曹汉威;张春红;黄忠;阮良基;林洁;;表达猪生长激素基因的重组腺病毒的构建及对猪生长的促进效果观察[J];畜牧兽医学报;2006年06期

2 陈平;杨玲麟;胡火珍;;SLC基因重组腺病毒的构建[J];四川大学学报(医学版);2007年03期

3 于新友;沈志强;管宇;南松剑;王金良;肖跃强;唐娜;;PRRSV HN25株ORF5基因的克隆和重组腺病毒的构建[J];畜牧与兽医;2010年01期

4 耿合员;孙元;韩宗玺;邵昱昊;仇华吉;孔宪刚;刘胜旺;;表达鸡传染性支气管炎病毒S1基因重组腺病毒的构建[J];中国预防兽医学报;2011年03期

5 陈平;黄李雅;袁耀宗;;大鼠活化STAT蛋白抑制剂1基因重组腺病毒质粒的构建及鉴定[J];中国生物制品学杂志;2011年04期

6 尹新华,张莉,于维汉;野生型p53基因转移对体外培养的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及其机制的研究[J];中国地方病学杂志;1998年05期

7 宋长绪,蒋智勇,王贵平,高向阳,赵亚华;猪圆环病毒2型GD株ORF2基因重组腺病毒的构建及其表达[J];中国预防兽医学报;2005年05期

8 张芳琳;刘勇;于澜;胡刚;吴兴安;史梦远;白文涛;王海涛;徐志凯;;汉滩病毒G1S0.7嵌合基因重组腺病毒的构建及鉴定[J];免疫学杂志;2006年02期

9 李玉峰;姜平;蒋文明;汤景元;;猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白重组腺病毒的构建与免疫原性测定[J];中国病毒学(英文版);2006年04期

10 刘志华;骆抗先;胡静;曹虹;何海棠;;乙型肝炎病毒全基因重组腺病毒感染免疫研究[J];肝脏;2006年06期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 刘耘;赵明;;人钠碘同向转运体的腺病毒重组[A];第四届全国中青年核医学学术会议论文汇编[C];2008年

2 张雪;邬开朗;乐鑫;朱应;吴建国;;重组腺病毒表达siRNA抑制SARS病毒基因的研究[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年

3 李凡;魏强;赵春燕;陈立;;腺病毒载体介导的HSV-tk基因杀伤肿瘤细胞的研究[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展（上册）[C];2001年

4 李勇;李伟荣;王健伟;王敏;何金生;于修平;洪涛;;表达轮状病毒VP6抗原重组腺病毒的免疫学效果研究[A];第6次全国微生物学与免疫学大会论文摘要汇编[C];2004年

5 何金生;王健伟;姜秀丽;王大燕;温乐英;董京芳;屈建国;洪涛;;人轮状病毒非复制型重组腺病毒粘膜免疫效果的研究[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

6 吴兴安;于澜;胡刚;张芳琳;白文涛;史梦远;王海涛;刘勇;徐志凯;;汉滩病毒G2重组腺病毒的表达及其免疫学特性研究[A];第6次全国微生物学与免疫学大会论文摘要汇编[C];2004年

7 祝卫国;宋长绪;王贵平;杨增歧;王旭荣;黄忠;张春红;;猪Ⅱ型圆环病毒ORF1、ORF2基因串联重组腺病毒的构建[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年

8 杜以军;姜平;杨晓玮;汤景元;李玉峰;李永东;;猪口蹄疫病毒多抗原表位重组腺病毒的构建与鉴定[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集（上）[C];2005年

9 周林福;朱毅;殷凯生;朱自路;;编码N端截短的IκBα突变体重组腺病毒的构建与鉴定[A];中华医学会第五次全国哮喘学术会议暨中国哮喘联盟第一次大会论文汇编[C];2006年

10 鲁俊鹏;田新贵;罗满林;李海涛;周志超;周荣;;B型流感病毒B/Guangzhou/01/2007株HA基因重组3型腺病毒的构建[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集（下册）[C];2009年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 记者 李玉成;志在与世界比肩[N];科技日报;2001年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 刘志华;用腺病毒载体介导的基因转移研究HBV/C区热点变异对小鼠免疫应答的影响[D];第一军医大学;2002年

2 梁蔚芳;聚乙二醇化干扰素α-2a与干扰素α-2a在体内和体外的抗乙型肝炎病毒活性研究[D];第一军医大学;2007年

3 王敏;基因优化的表达人轮状病毒重组腺病毒免疫效果研究[D];中国疾病预防控制中心;2008年

4 刘勇;轮状病毒VP7基因修饰、表达及免疫原性研究[D];中国协和医科大学;2000年

5 李广明;靶向PRRSV及其PAM细胞病毒受体基因shRNA重组腺病毒的构建与抑制PRRSV复制研究[D];南京农业大学;2009年

6 李卫华;表达HCV-NS3抗原的重组腺病毒载体疫苗的实验研究[D];四川大学;2005年

7 马树东;Her-2/neu膜外及跨膜区蛋白基因重组腺病毒的构建和诱导的免疫效应[D];第一军医大学;2004年

8 杨少丽;靶向斑马鱼VEGF的shRNA表达载体的构建及其对斑马鱼胚胎血管发育的影响[D];中国科学院研究生院（海洋研究所）;2007年

9 刘中华;不同茎部长度shRNA对模型小鼠EGFP基因表达干扰的研究[D];西北农林科技大学;2011年

10 罗保君;汉滩病毒重组腺病毒疫苗的基础研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 李玉峰;猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）病毒GP5蛋白重组腺病毒的构建与鉴定[D];南京农业大学;2003年

2 李凯;联合应用抗原递呈分子基因的汉坦病毒嵌合基因重组腺病毒的构建及表达产物鉴定[D];第四军医大学;2010年

3 汤景元;猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白重组腺病毒的构建与免疫特性研究[D];南京农业大学;2005年

4 徐琳;炭疽杆菌保护性抗原重组腺病毒疫苗的构建及气溶胶免疫探索性研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2006年

5 谢磊;猪瘟病毒主要抗原基因与猪IL2重组腺病毒的构建及鉴定[D];中国兽医药品监察所;2006年

6 田博;规模化悬浮培养哺乳动物细胞生产腺病毒工艺的实验研究[D];山东师范大学;2007年

7 孙普;A型口蹄疫病毒多基因重组腺病毒载体的构建[D];甘肃农业大学;2007年

8 陈超;猪肺炎支原体P97 C末端基因重组腺病毒的构建及其免疫效果的评价[D];中国农业科学院;2009年

9 苏永良;力生长因子、E肽重组腺病毒的构建及其在神经细胞中的表达[D];西南大学;2013年

10 戈小琴;肠道病毒71型VP1-VP4在重组腺病毒系统中的表达及免疫学评价[D];中国协和医科大学;2010年

，

本文编号：697285