重组小鼠IFN-β原核表达载体的构建及包涵体溶解条件的筛选

发布时间：2017-08-19 18:44

  本文关键词：重组小鼠IFN-β原核表达载体的构建及包涵体溶解条件的筛选

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【摘要】：目的:通过重组小鼠干扰素β(IFN-β)原核表达载体的构建及对包涵体溶解条件的筛选,建立IFN-β原核表达模型,为筛选适合的包涵体溶解条件提供实验依据。方法:小鼠新鲜肝组织中提取DNA,传统方法构建小鼠IFN-β原核表达载体并命名为IFN-β′。SDS-PAGE检测以传统方法、pH环境、溶解液成分、干菌与溶解液比例、溶解温度和溶解时间的改变对包涵体溶解效果的影响。结果:IFN-β′成熟蛋白鉴定结果与预测结果吻合,诱导表达正常。改变pH值、在溶解液中加入DTT对包涵体溶解效果无影响,包涵体经洗涤液洗涤后亦不能被溶解液所溶解,温度对包涵体溶解几乎无影响,溶解液的比例由1g菌∶5mL溶解液增加为1g菌∶20mL溶解液时能溶解部分IFN-β′蛋白包涵体。结论:成功构建重组小鼠IFN-β原核表达载体,其蛋白以包涵体形式存在,且不易被溶解,在筛选的包涵体溶解条件中仅溶解液比例为影响包涵体蛋白溶解条件。
【作者单位】： 内蒙古民族大学生命科学学院;吉林大学白求恩医学院生物化学与分子生物学教研室;
【关键词】： 干扰素β 原核表达 包涵体
【基金】：国家自然科学基金资助课题(81060098) 吉林省科技厅科研基金资助课题(20060416)
【分类号】：R363
【正文快照】： 干扰素β(interferon-β,IFN-β)具有广泛的抗病毒作用,对一般病毒感染有促进机体恢复及缩短病程的作用[1-2]。IFN-β对某些癌细胞有抑制作用,可下调细胞原癌基因的转录水平,下调某些生长因子受体表达[3],对巨噬细胞的功能有增进作用,并可调节T、B淋巴细胞的功能[4]。利用基

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本文编号：702372