大鼠Pig-a基因突变试验高通量方法的建立和验证

发布时间：2017-08-20 09:01

  本文关键词：大鼠Pig-a基因突变试验高通量方法的建立和验证

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【摘要】：目的体内Pig-a基因突变试验是近年来新开发的一种基因突变试验方法,该试验具有诸多优点,有望成为管理遗传毒理学的试验方法。之前建立的基础型方法具有良好的重复性,但其灵敏度有待进一步的提升。本研究作为国际联合验证的一部分,旨在引入免疫磁珠预筛选策略,对基础型方法进行优化,建立大鼠Pig-a基因突变试验高通量方法,并验证其灵敏度和特异性,并探讨与流式体内微核试验结合到同一个试验中的可能性。方法首先采用N-乙基-N-亚硝基脲(ENU)为阳性药建立大鼠Pig-a基因突变试验高通量方法,初步验证该方法的灵敏度和重复性,然后采用三聚氰胺、4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)和5-氟尿嘧啶(5-FU)等作为受试物来验证该方法的灵敏度和特异性。每个受试物试验中至少设置四个剂量组:最大耐受剂量(MTD)组、1/2MTD剂量组、1/4MTD剂量组和阴性对照组,每组5只雄性SD大鼠,均口服灌胃给药,给药容积为10 m.lkg-1,除4NQO连续给药28 d外,其他受试物均连续给药3 d,每天给药1次,分别于给药前1 d、首次给药后第15,29,45(或60)天颈静脉取血,检测Pig-a基因突变率,指标包括总红细胞(RBCs)Pig-a基因突变率、网织红细胞(RETs)Pig-a基因突变率和%RET。在末次给药后24 h颈静脉取血,检测微核率,检测指标包括网织红细胞微核率和%RET。结果 ENU试验中分析RBCs和RETs的数目分别提升到约108个和106个,单个样品的分析时间由约基础型方法的20 min降低到约7 min,ENU诱导的Pig-a基因突变率与Litron实验室采用高通量方法得到的结果一致,Pig-a基因突变的基线水平得到良好的控制;三聚氰胺试验中Pig-a基因突变和微核结果均呈阴性;5-FU试验中Pig-a基因突变结果呈阴性,微核结果均呈阳性;4NQO试验中Pig-a基因突变结果呈阳性,微核试验结果可疑。上述结果均基本符合预期。结论本研究成功建立了大鼠Pig-a基因突变试验高通量方法,与基础型方法比较,高通量方法具有良好的重复性和更高的灵敏度;试验结果初步表明大鼠Pig-a基因突变试验高通量方法具有较高的灵敏度和特异性,且可以整合至重复给药毒性试验中;大鼠Pig-a基因突变试验和流式体内微核试验可以有效地结合到同一个试验中。
【作者单位】： 中国医药工业研究总院上海医药工业研究院 国家上海新药安全评价研究中心;
【关键词】： 基因突变试验 高通量
【基金】：国家科技重大专项(2012ZX09505-001-003)
【分类号】：R-331
【正文快照】： 大鼠Pig-a基因突变试验高通量方法的建立和验证@张铭$中国医药工业研究总院上海医药工业研究院,国家上海新药安全评价研究中心!上海201203 @周长慧$中国医药工业研究总院上海医药工业研究院,国家上海新药安全评价研究中心!上海201203 @黄鹏程$中国医药工业研究总院上海医药

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本文编号：705682