HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体构建及其基因工程菌种稳定性的鉴定

发布时间：2017-08-21 06:39

  本文关键词：HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体构建及其基因工程菌种稳定性的鉴定

  更多相关文章： HER 原核表达 基因工程菌种 稳定性

【摘要】：目的构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的原核表达载体并鉴定其基因工程菌种稳定性。方法应用PCR技术以pCMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pET-22b原核表达载体;将该表达载体转化BL21大肠杆菌并挑取表达蛋白较高的克隆菌,划线接种传代50次;通过革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及蛋白诱导表达的Western blot分析鉴定e23sFv-Fdt-tBid免疫促凋亡蛋白表达工程菌的稳定性。结果成功构建pET-22b-e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体,并在BL21大肠杆菌中诱导表达;革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及Western blot法鉴定结果表明基因工程菌种稳定性良好,可以稳定表达免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid。结论成功构建了HER2靶向免疫促凋亡蛋白原核表达载体,鉴定了表达该免疫促凋亡蛋白的基因工程菌种稳定性,为HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的应用研究奠定了基础。
【作者单位】： 第四军医大学基础部免疫学教研室;新疆解放军第546医院;第四军医大学西京医院神经外科;第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室;第四军医大学药学系生物制药学教研室;
【关键词】： HER 原核表达 基因工程菌种 稳定性
【基金】：国家自然科学基金重点项目(81030045) 陕西省科学技术研究发展计划社发攻关项目(2012K13-02-06)
【分类号】：R392.9
【正文快照】： 人类表皮生长因子受体2(human epidermalgrowth factor receptor-2,HER2)过表达于乳腺癌、卵巢癌、胃癌、结肠癌、前列腺癌等多种癌组织中,并在肿瘤发生及发展中发挥重要作用,因此该分子是理想的肿瘤治疗靶标[1-3]。本课题组前期研究发现HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBi

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 高红伟;李素波;金泗虎;王玲燕;王颖丽;张丽;郁成雨;季守平;宫锋;;重组α-N-乙酰半乳糖胺酶工程菌菌种稳定性研究[J];中国输血杂志;2011年03期

2 巩新,吴军,唱韶红,马清钧;重组人干细胞因子菌种稳定性鉴定[J];军事医学科学院院刊;2004年01期

3 陈罗胜;殷润婷;徐寒梅;奚涛;;重组人内皮抑素工程菌菌种稳定性考察[J];生物加工过程;2008年06期

4 肖硕;洪华珠;彭建新;;基因工程菌中重组质粒的稳定性研究进展[J];生物技术通报;2008年04期

5 高红伟;李素波;艾雪;李妙;王颖丽;让文亮;季守平;宫锋;;新型基因重组α-半乳糖苷酶工程菌菌种稳定性研究[J];生物技术通报;2011年07期

6 白文栋;席文锦;王芳;王丽娟;杨韬;彭红艳;孟艳玲;杨安钢;;HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体的构建及其稳定表达细胞株的建立[J];细胞与分子免疫学杂志;2012年01期

7 姜扩;陈锐;王立锋;马琼;孟艳玲;杨安钢;马保安;裘秀春;;人抗HER2单链抗体/精氨酸九聚体融合蛋白的基因构建、表达及鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年11期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 彭冉;曹德菊;叶碧碧;李拓;金利侠;;抗铅联合苯酚降解多功能菌的构建[J];安徽农业大学学报;2010年02期

2 孙兰英;花日茂;唐欣昀;;有机磷农药降解菌及其基因工程研究新进展[J];激光生物学报;2010年02期

3 于德水;高娃;沙长青;张淑梅;高继国;;生防工程菌株BS-17A稳定性与抑菌活性初步研究[J];生物技术;2011年03期

4 梁晓梅;黎明;成X;贾红红;路福平;;大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒的构建及碱性蛋白酶的表达[J];生物技术通报;2011年06期

5 董晓弟;刘兆普;刘海燕;焦绪栋;秦松;;重组别藻蓝蛋白β亚基(His-β~(APC))表达菌株遗传稳定性的研究[J];生物学杂志;2011年04期

6 曹宁;侯喜林;谭君;刘彩霞;武龙宇;余丽芸;;重组干酪乳杆菌贮存期内质粒稳定性及活菌数的检测[J];中国生物制品学杂志;2013年02期

7 闫啸;徐立仁;关怡新;姚善泾;;重组亲环蛋白A的可溶性表达[J];浙江大学学报(农业与生命科学版);2010年04期

8 康小燕;蒋志伟;郁磊;羊扬;舒燕;姚丰华;朱国强;;重组质粒pACYC184-hok/sok的构建及稳定性研究[J];中国兽医学报;2011年03期

9 张媛;吴彦霖;刘倩;陈晨;秦媛媛;吴桂艳;高华;;Kinase-Glo激酶发光法体外测定蛋白激酶A活性[J];细胞与分子免疫学杂志;2012年07期

10 李睿;王革;钱秋娟;王秉翔;;重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21的传代稳定性[J];微生物学免疫学进展;2012年04期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 刘芳;分解肌酐、尿酸基因工程菌的构建及其功能研究[D];中南大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前9条

1 金伟;重组E.coli发酵产HLC过程中温度诱导模式、糖浓度和补料操作方式的优化[D];西北大学;2011年

2 闫彩芳;阿特拉津降解菌生物学特性的研究，，关键降解酶基因克隆及基因簇的构建[D];南京农业大学;2011年

3 张驰;重组大肠杆菌生产类人胶原蛋白Ⅲ发酵条件优化与分离纯化研究[D];西北大学;2009年

4 康小燕;hok/sok介导的质粒稳定性研究[D];扬州大学;2009年

5 孙兰英;有机磷农药毒死蜱降解菌玫瑰红红球菌mpd基因的克隆[D];安徽农业大学;2009年

6 宋佳;乙醇发酵相关基因在芽孢杆菌中的表达及分析[D];哈尔滨工业大学;2009年

7 李强;昆虫肠道芽孢杆菌的绿色荧光蛋白标记及其表达特性研究[D];重庆大学;2010年

8 张珊珊;胶质类芽孢杆菌KNP414染色体外遗传物质鉴定[D];浙江理工大学;2012年

9 孙元章;产异戊二烯大肠杆菌工程菌YJM23发酵工艺优化[D];山东轻工业学院;2012年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 鲍国强;章扬培;;ABO血型改造制备通用型红细胞[J];中国输血杂志;2008年12期

2 徐华;郁成雨;章扬培;;联合应用α-半乳糖苷酶和α-N-乙酰半乳糖胺酶实现红细胞AB→O血型转变[J];中国输血杂志;2008年12期

3 黄志立,罗立新,杨汝德,梁世中;纳豆激酶基因重组质粒在大肠杆菌与毕赤酵母中的稳定性[J];广东药学院学报;2001年04期

4 张求旺,杨英,梁希若;重组人白细胞介素-2工程菌的稳定性[J];广州医学院学报;1997年04期

5 姜立春;郭晓萍;涂朝勇;舒晓燕;阮期平;;重组嘧啶核苷磷酸化酶工程菌菌种的稳定性考察[J];华西药学杂志;2007年03期

6 高红伟,徐莉娟,田曙光,李素波,王颖丽,宫锋,章扬培;重组α-半乳糖苷酶工程菌菌种稳定性鉴定[J];军事医学科学院院刊;2004年06期

7 高红伟;宫锋;王璇琳;徐莉娟;由英;王颖丽;田曙光;章扬培;;α-半乳糖苷酶活性测定方法的研究[J];军事医学科学院院刊;2006年06期

8 章扬培,杨军,高新,贾延军,季守平,宫锋,任会明,刘泽澎,李素波,兰炯采,曹琼;用基因重组α-半乳糖苷酶进行B→O血型改造[J];科学通报;2003年01期

9 郁成雨;徐华;王立生;张建耕;章扬培;;新型高比活力α-N-乙酰半乳糖胺酶应用于人红细胞A→O血型改造[J];科学通报;2008年11期

10 宋宁,陈静娴,吴纬,焦丽华,姚志强;rhB工程菌在不同浓度氨苄青霉素选择压力下平板和摇瓶100代稳定性考察[J];四川大学学报(自然科学版);2002年S1期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 陈新爱;基因工程菌培养若干重要问题的研究[D];浙江大学;2002年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 刘红芹;王冬梅;屈浩;石琳;黄丽华;冯春玲;张丽艳;朱卫彬;;特异性HER2单克隆抗体的制备及初步应用[J];细胞与分子免疫学杂志;2010年05期

2 王骊丽,韩骅;人-鼠嵌合抗体表达载体的构建和抗人HER2抗体的表达[J];细胞与分子免疫学杂志;2004年03期

3 胡兵,田聆,卢铀,杨莉,赵霞,刘继彦,魏于全;鼠表皮生长因子受体胞外段原核表达、纯化与复性[J];生物医学工程学杂志;2003年02期

4 齐建国,周为民,谷淑燕;EB病毒早期蛋白P54的原核表达及其免疫原性的研究[J];生物技术通讯;2003年05期

5 沈飞;董宁征;范磊;赵益明;谢丽倩;阮长耿;;人血管性血友病因子A1区单克隆抗体的研制[J];中国血液流变学杂志;2008年01期

6 杨军;脂肪酸结合蛋白是一种内源性细胞保护剂[J];生理科学进展;1991年04期

7 缪军,薛采芳,李s

本文编号：711401