BrdU标记小鼠视网膜祖细胞的研究

发布时间：2017-08-22 01:15

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【摘要】：为了探讨BrdU(5-Bromo-2′-deoxyuridine)体外标记视网膜祖细胞(RPCs)的适宜浓度,将不同浓度BrdU(0.2、1、5和10μmol/L)与小鼠孕龄(E)17.5dRPCs共培养48h后,进行增殖或分化培养。用免疫荧光检测BrdU标记百分率及细胞分化潜能,用细胞计数法检测其增殖能力,用乳酸脱氢酶(LDH)法检测其细胞毒性。结果发现,0.2μmol/L BrdU不能明显标记RPCs,而1、5和10μmol/L 3种浓度BrdU均可有效标记RPCs,且三者的标记率相近(P0.05),1μmol/L BrdU无明显细胞毒性,对RPCs增殖、分化亦无明显影响,而5μmol/L和10μmol/L Br-dU均能抑制细胞增殖,并引起LDH释放增加,说明有明显的细胞毒性,10μmol/L BrdU还会阻碍RPCs向MAP2+神经元方向分化,但对其向GFAP+或glutamine synthetase+神经胶质细胞分化无明显影响。本研究表明,1μmol/L BrdU既能有效标记E17.5RPCs,又无显著毒副作用,是较适宜的浓度。
【作者单位】： 广东医学院广东省医学分子诊断重点实验室衰老研究所;中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室;
【关键词】： 视网膜祖细胞 BrdU 细胞毒性 分化
【基金】：国家自然科学基金资助项目(309766,81170846) 眼科学国家重点实验室专项经费资助项目(QN-01) 广东医学院科技创新基金资助项目(STIF201102) 广东省医学科研基金资助项目(A2012420)
【分类号】：R329
【正文快照】： 引言BrdU(5-Bromo-2′-deoxyuridine)是胸腺嘧啶的衍生物,可在DNA合成期(S期)替代替胸腺嘧啶整合入新合成的DNA中,是评价细胞增殖能力及细胞示踪的常用方法[1]。然而,BrdU对细胞的生长特性也有明显的影响,可导致细胞出现毒性反应、增殖抑制、分化异常、DNA突变及细胞周期延长

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本文编号：716220