组成型表达重组人C-反应蛋白的毕赤酵母菌株构建

发布时间：2017-08-23 00:18

  本文关键词：组成型表达重组人C-反应蛋白的毕赤酵母菌株构建

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【摘要】：目的:构建组成型表达重组人C-反应蛋白(Recombinant human C-reactive protein,rhCRP)的毕赤酵母工程菌株,表达、纯化rhCRP并鉴定其免疫反应性。方法:将设计合成的rhCRP基因克隆到表达载体pGAPZαA上并转化至毕赤酵母X-33中进行组成型分泌表达,通过His亲和层析柱纯化rhCRP。分别采用SDS-PAGE、Western blot和间接ELISA法检测目的蛋白并鉴定其免疫反应性。结果:重组表达载体pGAPZαA/rhCRP经酶切及DNA测序鉴定构建成功。重组毕赤酵母工程菌株成功组成型表达23kDa的rhCRP,27h即达到最大表达水平,表达量约3mg/L。经一步分离纯化获得纯度为96.58%的rhCRP,经间接ELISA检测表明其具有免疫反应性。结论:成功构建了组成型分泌表达rhCRP的毕赤酵母菌株,为进一步自主研发人CRP检测试剂奠定了基础。
【作者单位】： 大连大学医学院医学研究中心;大连大学生命科学与技术学院;
【关键词】： C-反应蛋白 毕赤酵母 组成型表达 免疫反应性
【基金】：国家自然基金项目(“单链抗体在大肠杆菌体内定点糖基化及其通过糖链以共价键定向固定的研究”,No.31070822/C080602) 辽宁省高等学校科研计划项目(“糖基化多肽聚合物的生物合成及其抑制毒素的活性研究”,No.L2010015)资助
【分类号】：R378
【正文快照】： 0引言C-反应蛋白是一种典型的急性时相反应蛋白,1930年由美国的Tillett WS和Francis T博士首次发现,因其和肺炎球菌的C多糖发生沉淀反应而得名[1]。CRP不仅是指示机体炎性反应状态的一个敏感而可靠的指标,而且也是一个理想的心血管疾病发病诊断及发病风险预测指标[2-5]。目前

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【相似文献】

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本文编号：721893