大鼠叉头蛋白转录因子O1基因的shRNA慢病毒载体构建与RNA干扰效率的鉴定

发布时间：2017-08-23 03:31

  本文关键词：大鼠叉头蛋白转录因子O1基因的shRNA慢病毒载体构建与RNA干扰效率的鉴定

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【摘要】：目的构建针对大鼠叉头蛋白转录因子O1(FoxO1)基因的shRNA慢病毒载体,并在大鼠系膜细胞(RMCs)上鉴定其沉默效率。方法利用四质粒合成法合成慢病毒载体。分别用阴性对照慢病毒载体(LV-shNC-GFP组)、shRNA慢病毒载体(LV-shRNA-FoxO1组)和感染增强剂(NC组)处理RMCs。72h后,采用流式细胞仪检测绿色荧光蛋白(GFP)阳性表达率。采用荧光定量PCR检测FoxO1mRNA表达情况。15d后,采用蛋白免疫印迹法检测FoxO1蛋白的表达情况。结果 LV-shNC-GFP、LV-shRNA-FoxO1组GFP阳性表达率分别为87.4%、95.8%;LV-shRNA-FoxO1组FoxO1的mRNA与蛋白表达量较NC、LV-shNC-GFP组均降低(P0.05)。其mRNA及蛋白抑制率分别达到86.2%和77.3%,而LV-shNC-GFP、LV-shRNA-FoxO1组FoxO1的mRNA及蛋白表达量差异无统计学意义(P0.05)。结论成功构建大鼠FoxO1基因的shRNA慢病毒载体能高效、稳定地抑制FoxO1的表达,为进一步研究FoxO1的功能和作用机制奠定研究基础。
【作者单位】： 郑州大学第一附属医院内分泌科;
【关键词】： 叉头蛋白转录因子O 短发夹样核糖核酸 慢病毒载体 系膜细胞 大鼠
【基金】：国家自然科学基金(81050009)
【分类号】：R346
【正文快照】： 叉头蛋白转录因子O1(FoxO1)是FoxO亚家族中主要成员之一。研究[1-3]表明,FoxO1在机体糖脂代谢、细胞增殖/凋亡、抗氧化应激和肿瘤发生等过程中发挥重要作用。目前,关于FoxO1的功能及其作用机制仍需进一步探讨。以往,调节FoxO1表达的脂质体介导法及腺病毒载体等转基因技术分别，

本文编号：722765