淫羊藿提取物对Cuprizone介导的髓鞘脱失动物模型的影响及机制初探

发布时间：2017-08-23 23:06

  本文关键词：淫羊藿提取物对Cuprizone介导的髓鞘脱失动物模型的影响及机制初探

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【摘要】：目的:多发硬化是以炎性脱髓鞘为主要病理改变的自身免疫性疾病,影像学研究发现该病在脑和脊髓白质可见多个脱髓鞘病灶,如何保护髓鞘脱失是治疗多发性硬化的关键。中医素有“补肾填髓”理论,补肾的中药是否能够保护髓鞘的脱失?本课题将研究补肾中药淫羊藿的有效成分淫羊藿黄酮(epimedium flavonoids,EF)、淫羊藿苷(icariin,ICA)对髓鞘脱失的影响并探讨其可能的作用机制,为进一步研究开发抗多发性硬化髓鞘脱失的新型药物提供实验依据。方法:本实验以掺入0.2%双环己酮草酰二腙(cuprizone,CPZ)的特制饲料饲喂雌性C57BL/6J小鼠诱发中枢白质(如胼胝体)髓鞘脱失的实验动物模型:饲喂含CPZ的特制饲料6周引发实验动物白质急性可逆性脱髓鞘;饲喂含CPZ的特制饲料连续12周引发动物不可逆性慢性脱髓鞘;受试药物在髓鞘脱失前经灌胃给予,连续给药3~4周以观察药物对急、慢性髓鞘脱失的影响。为进一步观察受试药物对髓鞘再生的影响,在饲喂含CPZ特制饲料引发髓鞘脱失最为严重的第5周末,将模型组及给药组的动物饲料改为正常饲料以诱发其髓鞘脱失的可逆性恢复,观察药物对髓鞘再生是否具有促进作用。髓鞘蛋白含量采用western blotting(蛋白免疫印迹)的方法检测;髓鞘脱失情况采用Oil Red O(油红O)染色法、LFB-PAS(坚牢蓝-糖原)染色法、髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)免疫组织化学染色法检测;成熟少突胶质细胞(GST-pi标记)、少突胶质细胞前体细胞(NG2标记)、胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor-1,IGF-1)、脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)均采用免疫组织化学染色法检测;在髓鞘再生修复模型上检测小胶质细胞(Iba-1标记)、星形胶质细胞(GFAP标记)、脑源性神经营养因子(BDNF)的表达采用组织免疫荧光染色法。结果:1.CPZ能够成功诱导C57/BL6J小鼠中枢白质(胼胝体)的髓鞘脱失,EF能够增加胼胝体部位髓鞘的染色面积和着色深度,EF降低少突胶质细胞前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)的表达、促进髓鞘脱失部位成熟少突胶质细胞(oligodendrocytes,OLs)的表达、促进神经营养因子IGF-1的表达。2.在CPZ诱导的急、慢性髓鞘脱失动物模型中,ICA皆能够有效增加胼胝体部位髓鞘的染色面积和着色深度,ICA亦能够降低OPCs的表达、促进髓鞘脱失部位OLs的表达、促进神经营养因子BDNF的表达。3.在髓鞘再生修复小鼠模型上ICA能够有效增加CPZ引起的髓鞘特异蛋白髓鞘碱性蛋白MBP含量的降低。ICA也能有效抑制小胶质细胞(Microglia)以及星形胶质细胞(Astroglia)的过度活化。此外,ICA下调有CPZ诱导的Olig2的表达。结论:1.淫羊藿提取物淫羊藿苷(ICA)、淫羊藿黄酮(EF)对CPZ介导的急、慢性髓鞘脱失动物模型均有较好的保护作用,能够有效地保护髓鞘脱失,其作用机制可能与其降低少突胶质前体细胞的数量、增加成熟少突胶质细胞的数量、促进神经营养因子IGF-1、BDNF等的表达有关。2.淫羊藿中有效单体成分ICA还具有促进髓鞘再生修复的作用,调节小胶质细胞、星形胶质细胞的活化可能参与了ICA的促髓鞘再生修复机制。
【关键词】：髓鞘脱失模型 铜离子螯合剂 淫羊藿苷 淫羊藿黄酮
【学位授予单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5;R-332
【目录】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 英文缩略词10-12
• 前言12-15
• 一 实验材料及方法15-29
• 1 实验动物15
• 2 实验抗体及试剂15-16
• 3 主要仪器设备16-17
• 4 实验方法17-29
• 4.1 特制饲料制备17
• 4.2 动物分组及给药17-19
• 4.3 Western Blot（蛋白免疫印迹）19-24
• 4.4 病理染色24-26
• 4.5 免疫组织化学染色26-28
• 4.6 数据统计及处理方法28-29
• 二 实验结果29-61
• 1 EF对Cuprizone介导的急性髓鞘脱失的影响29-39
• 1.1 CPZ对小鼠急性髓鞘脱失随时间变化的影响29
• 1.2 EF对CPZ介导的胼胝体急性髓鞘脱失的影响29-33
• 1.3 EF对CPZ介导的急性髓鞘脱失成熟少突胶质细胞（OLs）和少突胶质前体细胞（OPCS）的影响33-37
• 1.4 EF对CPZ介导的急性髓鞘脱失动物模型胰岛素样生长因子（IGF-1）表达的影响37-39
• 2 ICA对CPZ介导的急、慢性髓鞘脱失的影响39-53
• 2.1 ICA对CPZ介导的胼胝体急性髓鞘脱失的影响39-42
• 2.2 ICA对CPZ介导的胼胝体慢性髓鞘脱失的影响42-45
• 2.3 ICA对CPZ介导的急性髓鞘脱失成熟少突胶质细胞（OLs）和少突胶质前体细胞（OPCS）的影响45-49
• 2.4 ICA对CPZ介导的急性髓鞘脱失动物模型脑源性神经生长因子（BDNF）表达的影响49-53
• 3 ICA 对 CPZ 介导的小鼠髓鞘再生修复模型的影响及机制初探53-61
• 3.1 CPZ 介导的急性髓鞘脱失动物模型中髓鞘含量随时间的变化53-57
• 3.2 ICA 对 CPZ 介导的髓鞘再生的影响57-59
• 3.3 ICA对CPZ介导的髓鞘再生小鼠模型脑内小胶质细胞活化的影响59-61
• 三 结论61-62
• 四 讨论62-66
• 参考文献66-72
• 附录72-76
• 综述76-83
• 参考文献81-83
• 个人简历83
• 攻读硕士学位期间发表论文情况83-84
• 致谢84

【参考文献】

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1 郭宝林，，王春兰，肖培根，陈建民;HPLC法分析淫羊藿的黄酮类成分[J];西北药学杂志;1996年05期

2 孟宪丽,张艺,李建亚,沈映君,胡鹏,肖菁;淫羊藿总黄酮对老年大鼠神经内分泌免疫调节作用的研究[J];中药药理与临床;1998年04期

本文编号：727805