慢病毒介导RNAi干扰β-catenin对小鼠骨髓间充质干细胞生物学行为的影响

发布时间：2017-08-29 07:37

  本文关键词：慢病毒介导RNAi干扰β-catenin对小鼠骨髓间充质干细胞生物学行为的影响

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【摘要】：本研究通过构建β-连环蛋白(β-catenin)特异的RNAi慢病毒表达载体,探讨阻断Wnt/β-catenin信号通路对骨髓间充质干细胞(MSC)生物学行为的影响。设计3对针对β-catenin mRNA不同位点的shRNA编码序列,分别连接到慢病毒载体质粒PLB中,构建PLB-β-catenin/shRNA1,PLB-β-catenin/shRNA2和PLB-β-catenin/shRNA3;将重组质粒与慢病毒包装质粒及包膜蛋白质粒共转染293FT细胞,收获病毒颗粒,浓缩后测定病毒滴度,感染MSC细胞,并应用流式细胞术分选GFP阳性细胞,Western blot和RT-PCR验证其对细胞内β-catenin基因表达的抑制效果,筛选干扰效率最高质粒;CCK-8法检测细胞增殖,Annexin-V/7-AAD法检测干扰后细胞凋亡情况,细胞划痕实验及Transwell实验检测MSC迁移能力。结果表明:构建的特异性慢病毒siRNA干扰组(PLB-β-catenin/shRNA2)能有效抑制β-catenin的mRNA和蛋白表达,并抑制细胞的增殖;而空载体对照组(PLB group)和正常对照组(control group)细胞增殖无明显变化,两组之间无显著的统计学差异(P0.05);流式细胞术检测结果显示,采用血清饥饿法处理后,干扰组细胞的凋亡率明显增加,但两对照组之间无统计学差异(P0.05);细胞划痕和Transwell实验显示,干扰组MSC的迁移能力明显降低,对照组细胞迁移能力无明显变化。结论:构建的特异RNAi慢病毒能够有效抑制β-catenin基因的表达,减少细胞内目的基因mRNA和蛋白的水平,从而对MSC细胞的增殖、凋亡和迁移能力产生重要影响。
【作者单位】： 徐州医学院附属医院血液科 徐州医学院移植免疫实验室;
【关键词】： RNA干扰 慢病毒载体 wnt信号 β-catenin 间充质干细胞 生物学行为
【分类号】：R329.28
【正文快照】： 骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymalstem cells,BMMSC)是一类存在于骨髓中的非造血干细胞,因其具有取材方便、培养与扩增方便、免疫原性低、连续传代培养和冻存后仍具有多向分化潜能等优点,已被广泛应用于细胞生物学基础研究、干细胞和基因治疗及组织工程学研究等领域,

【共引文献】

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本文编号：752109