重组腺病毒介导恒河猴CD40L胞外段基因在恒河猴未成熟树突状细胞中的表达和鉴定

发布时间：2017-08-29 08:28

  本文关键词：重组腺病毒介导恒河猴CD40L胞外段基因在恒河猴未成熟树突状细胞中的表达和鉴定

  更多相关文章： 恒河猴 未成熟树突状细胞 重组腺病毒载体 免疫耐受

【摘要】：目的：鉴定表达恒河猴CD40L胞外段基因的重组腺病毒载体在恒河猴未成熟树突状细胞(immature dendritic cell, imDC)中的稳定表达。 方法： 1)应用HEK293细胞包装腺病毒载体pAd-CMV-sCD40L,并用deno-X纯化试剂盒纯化病毒； 2)使用淋巴细胞分离液分离恒河猴单个核细胞； 3)磁珠法分选恒河猴骨髓血中CD34+阳性细胞,应用IL-4及GM-CSF诱导分化为imDC,并通过流式细胞术鉴定纯度及成熟度； 4)重组腺病毒载体感染恒河猴imDC; 5) PCR以及Western Blot鉴定CD40L在imDC中的表达。 6)混合淋巴细胞培养,使用CCK-8试剂盒检测不同处理组的树突状细胞对刺激T细胞增殖的能力。 结果：PT-PCR扩增,扩增产物经电泳,可见一大小约为170bp条带,与目的基因扩增出的理论条带大小一致；western blot可见23KD处出现特异性条带,与目的蛋白大小一致；混合淋巴细胞反应中(相同的反应比例),重组腺病毒感染未成熟树突状细胞处理组对刺激T细胞增殖的能力显著低于其他处理组。 结论：恒河猴CD40L胞外段基因可以在恒河猴imDC中稳定的表达,且具有阻断CD40-CD40L通路,从而抑制T细胞增殖。 展望：重组腺病毒感染的未成熟树突状细胞在恒河猴肝移植中将被注射入受体恒河猴门静脉中,预计可有效诱导恒河猴肝移植免疫耐受。
【关键词】：恒河猴 未成熟树突状细胞 重组腺病毒载体 免疫耐受
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R657.3
【目录】：

• 中英文~.写词表5-6
• 中文摘要6-7
• 英文摘要7-9
• 引言9-11
• 主要实验材料11-15
• 实验方法15-31
• 实验结果31-38
• 讨论38-42
• 参考文献42-44
• 综述44-56
• 参考文献50-56
• 论文发表情况56-57
• 致谢57

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 周广臣,许纯孝,谢叔良;同种异体移植肾组织中CD40/CD40L的表达及其意义[J];肾脏病与透析肾移植杂志;2002年04期

2 胡明道;赵恋峰;于恒海;唐继红;黄明;刘峰;周玉凯;李立;;CTLA4-Ig融合蛋白诱导猕猴同种异体肝移植免疫耐受的实验研究[J];中国普外基础与临床杂志;2010年01期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 钱莉;调节性树突状细胞诱导新型调节性B细胞亚群的产生及其相关机制研究[D];第二军医大学;2009年

，

本文编号：752308