血管内皮细胞黏附分子胞外区基因真核表达载体构建及表达

发布时间：2017-09-13 16:17

  本文关键词：血管内皮细胞黏附分子胞外区基因真核表达载体构建及表达

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【摘要】：目的构建并表达血管内皮细胞黏附分子(VCAM-1)胞外区基因真核表达载体。方法从小鼠NIH/3T3细胞提取总RNA,以其为模板通过RT-PCR扩增VCAM-1胞外区(D1-D4结构域)cDNA。利用PCR获得VCAM-1胞外区基因,连接pMD19-T载体,进行基因序列测序。将VCAM-1 D1-D4目的片段插入到真核表达载体pIRES2-AcGFP1-Nuc中,构建重组真核表达质粒pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1。经双酶切鉴定VCAM-1胞外区基因真核表达载体构建的成功与否。利用脂质体把pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1导入至人B淋巴性白血病细胞株(Raji)内。结果基因测序结果表明成功扩增出VCAM-1胞外区基因,双酶切鉴定表明重组的真核表达质粒pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1构建成功。Western blot结果显示导入pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1质粒的Raji细胞中VCAM-1高表达。细胞结合实验表明,表达的VCAM-1与前B细胞(70Z/3)表面的VLA-4特异性结合。结论 VCAM-1真核表达载体构建及表达成功,为前B细胞克隆形成机理以及为B细胞分化发育研究提供实验依据。
【作者单位】： 辽宁师范大学生命科学学院;大连大学免疫学研究所;
【关键词】： 血管内皮细胞黏附分子 真核表达载体 真核表达
【基金】：国家自然科学基金(30972675,31270864) 大连市科技计划项目(2010J21DW011)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 前B细胞分化发育阶段被认为是整个B细胞发育过程中的关键环节[1]。前B细胞增殖、分化与其生长发育的造血微环境密切相关。它通过细胞表面的黏附因子与造血微环境中的基质细胞黏附,才能增殖、分化。在前B细胞与基质细胞相互作用中,前B细胞表面的迟现抗原4(very late antigen-4,

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本文编号：844727