自噬对血管性痴呆大鼠海马CA1区突触可塑性相关蛋白表达的影响

发布时间：2016-10-17 18:02

  本文关键词：自噬对血管性痴呆大鼠海马CA1区突触可塑性相关蛋白表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

《华北理工大学》 2015年

自噬对血管性痴呆大鼠海马CA1区突触可塑性相关蛋白表达的影响

刘金霞  

【摘要】：目的通过对血管性痴呆模型大鼠分别进行侧脑室注射自噬抑制剂(3-甲基腺嘌呤)、自噬激动剂(雷帕霉素),Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力,检测自噬特异性蛋白及突触可塑性相关蛋白的表达,探讨自噬对血管性痴呆大鼠海马CA1区突触可塑性相关蛋白表达的影响,为血管性痴呆的发病机制及治疗提供理论依据。方法1选取192只健康雄性SD大鼠,使用随机数字法将实验大鼠随机分为:假手术组(Sham组)、血管性痴呆模型组(VD组)、自噬抑制剂(3-甲基腺嘌呤)组(3-MA组)、自噬激动剂(雷帕霉素)组(Rap组)。每组又分为模型制备成功后1 w、2 w、4 w、8 w 4个亚组。2血管性痴呆模型制备:应用改良的Pulsinelli四血管阻断法进行血管性痴呆模型制备,即电凝双侧椎动脉致永久性闭塞,24小时后反复短暂性夹闭双侧颈总动脉,造成大鼠全脑缺血,制备大鼠血管性痴呆模型。假手术组大鼠在术中只进行双侧椎动脉及颈总动脉的暴露,不予以阻断血流。3给药方法:自噬抑制剂(3-甲基腺嘌呤)组和自噬激动剂(雷帕霉素)组大鼠于造模前30min,分别进行侧脑室注射3-甲基腺嘌呤和雷帕霉素。4用Morris水迷宫测定大鼠的学习记忆能力。5采用免疫组化法检测大鼠海马CA1区自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3 II(microtubule associated protein 1 light chain 3,MAP1-LC3II,即LC3II)的表达,免疫印迹法检测大鼠海马CA1区自噬相关蛋白LC3II/LC3I的比值;应用免疫组化法及免疫印迹法检测大鼠海马CA1区突触可塑性相关蛋白的表达,包括突触素(synaptophysin,Syn),突触后膜致密物质95(Postsynaptic density material 95,PSD-95),生长相关蛋白(growth-associated protein,GAP-43),微管相关蛋白2(microtubule-associated protein2,MAP-2)。6采用OLYMPUS摄像显微镜(400×)摄像,并应用Motic Med 6.0数码医学图像分析系统进行分析,免疫印迹结果用Image J分析。7数据均采用SPSS17.0统计软件进行分析,计量资料用均数±标准差(sx±)表示,多组间均值比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),两组间比较采用t检验,两变量间关系判断采用Pearson相关性分析方法进行相关性分析,以P0.05认为有统计学意义。结果1与Sham组相比较,VD组观察的各时间点逃避潜伏期在1 d时无明显变化(P0.05),第2 d以后各观察时间点逃避潜伏期较Sham组延长,差异有统计学意义(P0.05或P0.01),穿越原平台位置次数均较Sham组少(均P0.05);与VD组比较,3-MA组大鼠各时间点逃避潜伏期在1 d时无明显变化(P0.05),第2 d以后各测试时间点逃避潜伏期缩短,差异有统计学意义(P0.05或P0.01),穿越原平台位置次数均增多(均P0.05);与VD组相比,Rap组大鼠各时间点逃避潜伏期在1 d时无明显变化(P0.05),第2 d以后各测试时间点逃避潜伏期延长,差异有统计学意义(P0.05或P0.01),穿越平台的次数均减少(均P0.05)。2与Sham组比较,VD组各时间点LC3II蛋白阳性表达细胞数及LC3II/LC3I的比值在1 w时较小,2 w增大,4 w时达到高峰,8 w减少,差异有统计学意义(均P0.01);与VD组比较,3-MA组各时间点LC3II蛋白表达阳性细胞数及LC3II/LC3I的比值水平较VD组低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01);与VD组比较,Rap组各时间点LC3II蛋白表达阳性细胞数及LC3II/LC3I的比值水平较VD组高,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。3与Sham组比较,VD组各时间点Syn、PSD-95、MAP-2蛋白表达均减少,GAP-43蛋白表达均增加,差异有统计学意义(均P0.01);与VD组比较,3-MA组各时间点Syn、PSD-95、MAP-2、GAP-43蛋白表达水平较VD组高,差异有统计学意义(P0.05或P0.01);与VD组比较,Rap组各时间点Syn、PSD-95、MAP-2、GAP-43蛋白表达水平较VD组低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。4相关性分析结果示自噬相关蛋白LC3II或LC3II/LC3I与突触可塑性相关蛋白呈负相关(均P0.01);自噬相关蛋白LC3II与GAP-43无明显相关性(P0.05)。结论1自噬参与了血管性痴呆的发病过程,在一定程度上增加血管性痴呆大鼠海马CA1区自噬的发生,大鼠的学习记忆能力可能减退。2突触可塑性相关蛋白在血管性痴呆发病中起重要作用,突触可塑性相关蛋白表达减少可能会减弱大鼠的学习记忆能力。3自噬对血管性痴呆大鼠海马CA1区突触可塑性相关蛋白表达可能具有抑制作用,在一定程度上增加自噬可能会通过抑制血管性痴呆大鼠海马CA1区突触可塑性相关蛋白表达而加重血管性痴呆大鼠的学习记忆障碍。

【关键词】：
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R749.13
【目录】：

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