叶酸及DNMT1、DNMT3A基因表达在阿尔茨海默病中的作用研究

发布时间：2016-11-11 17:41

  本文关键词：叶酸及DNMT1、DNMT3A基因表达在阿尔茨海默病中的作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

《山东大学》 2014年

叶酸及DNMT1、DNMT3A基因表达在阿尔茨海默病中的作用研究

曹彦军  

【摘要】：背景： 阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是一种以细胞内神经炎性斑块形成(neurite plaques,NPS)、神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs)及神经突触和神经元脱失为主要病理改变的慢性进行性中枢神经系统变性疾病,这些病理改变主要集中在额、颞和顶叶,海马最为明显。AD以渐进性认知功能障碍和人格精神异常为主要临床表现。目前在世界范围内约有2500万人罹患AD,给患者造成严重的痛苦,给家庭和社会带来沉重的负担,已成为严重的社会公共卫生问题。但至今AD发病机制仍不完全清楚,基因突变可解释家族性AD的发病,但家族性AD仅占AD患者的1%以下,绝大部分的AD患者呈散发性。近年研究表明表观遗传修饰尤其是DNA甲基化的改变参与散发性AD的发病。特定基因启动子区甲基化程度异常及全基因组甲基化程度减低均与散发性AD的发生有着密切关系。DNA甲基化是指：S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)提供甲基供体,在甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMTS)和甲基结合蛋白(Methl binding proteins,MBPs)的作用下,将甲基(-CH3)转移到DNA分子特定碱基的过程。叶酸缺乏时,一方面可以引起DNA链断裂和碱基位点脱失等DNA损伤,另一方面可以造成SAM生成减少,导致可用的甲基基团减少,由此引起一系列DNA甲基化状态的改变,对基因的表达起到调控作用。 之前有关散发性阿尔茨海默病的DNA甲基化研究主要集中在DNA总体甲基化和特定基因启动子区甲基化两个方面,DNA甲基化的调控因素(如甲基转移酶等)的相关研究相对较少。本研究采用病例对照和体外实验相结合的方法,研究DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A基因表达和叶酸水平与散发AD的关系,有助于了解AD的发病机制,为治疗和预防阿尔茨海默病提供新的思路和方法。 第一部分散发阿尔茨海默病患者外周血DNMT1、DNMT3A基因表达及血清叶酸水平的病例对照研究 目的： 探讨散发阿尔茨海默病患者与正常对照组相比外周血是否存在DNMT1、DNMT3A基因表达和血清叶酸水平的异常,为阿尔茨海默病的治疗、预防及生物标记研究提供新的思路。 方法： 1病例采集AD组：随机收集AD患者55例,均为2013年05月-2014年1月山东大学第二医院神经内科门诊和住院病人。所有AD患者均行MMSE、HIS、 HAMD、CDR量表检测,并根据临床痴呆评定量表(CDR)得分将AD病例分为轻度13例、中度12例、重度30例。入组标准：①所有患者符合美国国立神经疾病语言障碍卒中研究所和阿尔茨海默病及相关疾病协会(NINCDS-ADRDA)中“很可能的AD”诊断标准2010年修订版；②MMSE评分：文盲≤17分,小学程度20分,中学程度≤22分,大学程度24分;HIS4分；HAMD＜8分；③无脑外伤,无脑出血、脑梗死、冠心病等心脑血管疾病病史；④无其他严重躯体疾病,如脑积水、硬膜下血肿、恶性肿瘤、甲状腺功能低下、感染、肝功能异常、神经梅毒、HIV感染、代谢障碍及中度等；⑤无精神疾病及痴呆家族史。正常对照组：随机收集同期性别、年龄相匹配的健康查体老年人31例,均行MMSE量表检测。入组标准：①MMSE≥27分；②无脑外伤,无脑出血、脑梗死、冠心病等心脑血管疾病病史；③无其他严重躯体疾病,如脑积水、硬膜下血肿、恶性肿瘤、甲状腺功能低下、感染、肝功能异常、神经梅毒、HIV感染、代谢障碍及中度等；④无精神疾病及痴呆家族史。 2指标检测：所有入选研究对象均同时留取清晨空腹EDTA抗凝全血3m1,空腹非抗凝全血3m1,应用实时荧光定量RT-PCR技术检测DNMT1、DNMT3A基因表达,应用化学发光法检测血清叶酸水平。实验结果使用SPSS16.0进行统计分析。 结果： 1、独立样本t检验结果显示病例组与对照组在年龄、性别构成、受教育水平、身高、体重、BMI方面无显著差异(P0.05),具有可比性。 2、独立样本t检验结果显示与正常对照组相比,病例组外周血DNMT1、 DNMT3A基因表达显著升高(P0.05),血清叶酸水平明显下降(P0.000)。 3、单因素方差分析显示病例组内轻、中、重度阿尔茨海默病患者外周血DNMT1、DNMT3A基因表达和血清叶酸水平均无显著性差异(P0.05)。 4、独立样本t检验显示病例组和对照组内不同性别阿尔茨海默病患者外周血DNMT1、DNMT3A基因表达和血清叶酸水平均无显著性差异(P0.05)。 5、单因素方差分析显示病例组和对照组内不同受教育程度阿尔茨海默病患者外周血DNMT1、DNMT3A基因表达和血清叶酸水平无显著差异(P0.05)。 6、单因素方差分析显示病例组和对照组内不同年龄阶段阿尔茨海默病患者外周血DNMT1、DNMT3A基因表达和血清叶酸水平无显著性差异(P0.05)。 7、Spearman秩相关分析结果显示病例组和对照组中DNMT1、DNMT3A基因表达和血清叶酸水平与年龄、受教育水平均无显著相关性(P0.05)。 8、Spearman秩相关分析结果显示病例组和对照组中叶酸水平与DNMT1、 DNMT3A基因表达均无显著相关性(P0.05)。 第二部分 叶酸缺乏对SHSY5Y细胞生长的影响及与DNMT1、DNMT3A基因表达的关系 目的： 研究叶酸缺乏对SH-SY5Y细胞DNMT1、DNMT3A基因表达的影响,并通过细胞活性和细胞外Aβ40的检测研究叶酸缺乏对神经细胞生长的影响。材料和方法： 使用不同叶酸浓度的培养基培养人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y), MTT法检测细胞活性,ELISA法检测细胞外Aβ40含量,实时荧光定量RT-PCR法检测细胞DNMT1、DNMT3A的基因表达。实验结果使用SPSS16.0进行统计分析。结果： 1、与对照组相比,各实验组(0、8、16、32ug/ml)叶酸浓度对细胞活性均有抑制作用,细胞活性均降低,差异具有统计学意义(P0.05)。实验组各组两两比较,差异无统计学意义。 2、与对照组、8、16、32ug/ml组分别两两比较,Oug/ml组细胞外Aβ40浓度明显增加,差异具有统计学意义(p0.01)。对照组、8、16、32ug/ml组组间比较无显著性差异。 3、与对照组、8、16、32ug/ml组分别两两比较,0ug/ml组细胞DNMT1、 DNMT3A的基因表达均明显增加,差异具有统计学意义(p0.01)。 结论： 1、散发性阿尔茨海默病外周血存在DNMT1、DNMT3A基因表达的升高,为阿尔茨海默病生物标志物的研究提供了新的依据和方向。 2、叶酸缺乏是散发性阿尔茨海默病的危险因素,可以造成神经细胞外Aβ40的累积,抑制神经细胞的存活。但补充叶酸要适度,叶酸过量也会抑制神经细胞的存活,具体剂量界定有待进一步研究。 3、DNMT1、DNMT3A的基因表达升高可能是叶酸缺乏造成的结果。

【关键词】：
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.16
【目录】：

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1 李玲玲;刘蓉;叶兰;徐运;;抗氧化剂在阿尔茨海默病治疗中的地位和临床应用前景[J];国际神经病学神经外科学杂志;2009年06期

2 林华型;盛树力;;阿尔采末病发病机制与表观遗传学研究进展[J];中国药理学通报;2010年05期

3 卜碧涛,张旻,王伟,Inez Vincent;14-3-3蛋白与阿尔茨海默病tau蛋白异常磷酸化的关系[J];中华神经科杂志;2005年10期

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1 甘雪琼;宋旭红;李蕊;张巧霞;杜牡丹;黄东阳;;正常肝和肝癌细胞中DHRS4L2基因选择性剪接亚型的克隆及其表达调控研究[J];癌变·畸变·突变;2010年05期

2 王海;胡世莲;;表观遗传学中DNA甲基化和组蛋白修饰与胃癌关系的研究进展[J];安徽医药;2012年04期

3 赵烨;徐美华;董文心;;阿尔茨海默病药物治疗进展[J];世界临床药物;2011年10期

4 黄丹华;周珊珊;张黎明;;氧化应激与阿尔茨海默病[J];国际神经病学神经外科学杂志;2012年03期

5 陶瑞松;王伟;;14-3-3蛋白与突触核蛋白磷酸化的研究进展[J];合肥师范学院学报;2013年03期

6 汪侃;钱叶本;;表观遗传学与肝癌关系的研究进展[J];肝胆外科杂志;2013年05期

7 戚韵雯;何选丽;朱丽娟;刘梦洁;晏勇;;糖尿病小鼠认知功能及不同时相点硫化氢的表达[J];第三军医大学学报;2013年24期

8 郭敏;李树民;张弘;李刚;;阿尔兹海默病的表观遗传学机制研究进展[J];中国临床药理学杂志;2014年03期

9 郭有;高艳芳;胡恭华;;肝细胞癌表观遗传发病机制的研究进展[J];重庆医学;2014年16期

10 洪雁;梁智;方芳;刘英;黄文越;苏宇;;事件相关电位在血管性痴呆中的应用价值[J];广西医学;2014年05期

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1 孙国杰;刘若兰;杜艳军;陈邦国;王述菊;周华;;14-3-3蛋白在阿尔茨海默病中作用机制的研究进展[A];2011中国针灸学会年会论文集（摘要）[C];2011年

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2 刘佳;S100A4基因DNA甲基化在喉癌中的作用及调控机制的研究[D];中国医科大学;2010年

3 张广华;子宫内膜癌细胞孕激素受体基因表观遗传学调控的研究-DNA甲基化及表达沉默相关的染色质成分变化[D];天津医科大学;2010年

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8 梁丽娜;脾阴虚糖尿病认知功能障碍的发病机制及滋补脾阴方药的调控作用研究[D];大连医科大学;2012年

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2 甘雪琼;正常肝和肝癌细胞中DHRS4L2基因选择性剪接亚型的克隆及其表达调控研究[D];汕头大学;2010年

3 王淑;阿尔茨海默病鼠模型中甲基化致病基因的筛选研究[D];吉林大学;2012年

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8 荣翠平;几种中药单体对AD细胞活性影响的筛选及机制研究[D];广州中医药大学;2013年

9 吴青;酸枣仁中乙酰胆碱酯酶抑制剂的筛选研究[D];湖南师范大学;2013年

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1 钱云;张志珺;;阿尔茨海默病伴抑郁症的临床研究进展[J];国际精神病学杂志;2007年03期

2 高丽;;“胰岛素在阿尔茨海默病发病机制中的研究进展”更正启事[J];中国临床神经科学;2010年04期

3 邢安凤;霍春月;;中性内肽酶和阿尔茨海默病的基因联系[J];北京医学;2011年04期

4 姜民慧;;小鼠阿尔茨海默脑病的模型[J];国外医学情报;1995年17期

5 ;周围神经及神经节疾病[J];国外科技资料目录(医药卫生);1998年08期

6 卢家红;;阿尔茨海默病与维生素B12[J];国外医学.老年医学分册;1999年06期

7 李潇;β-secretase与阿尔茨海默病药物[J];生物化学与生物物理学报;2000年02期

8 许祖年;Alzheimer病39例临床分析[J];右江民族医学院学报;2000年04期

9 相洪琴;;干预阿尔茨海默病的基因疗法[J];国外医学情报;2000年02期

10 杨静芳,陈彪,柏华,董秀敏,武剑,陈保生,贾建平;载脂蛋白E基因多态性与中国人阿尔茨海默病和颈动脉粥样硬化相关性研究[J];基础医学与临床;2001年01期

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1 陈霞平;涂自良;杜士明;王启斌;张澈;张蓬华;;阿尔茨海默病的药物治疗进展[A];湖北省药学会第十一届会员代表大会暨2007年学术年会论文汇编[C];2007年

2 满永;夏永静;王抒;;载脂蛋白A-Ⅳ基因360位点与阿尔茨海默病和帕金森病的关系[A];中国病理生理学会动脉粥样硬化专业委员会五届一次会议论文集[C];2002年

3 王乃东;赵永波;;阿尔茨海默病的免疫治疗[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年

4 施海姗;侯乐;宁玉萍;郑东;钟笑梅;;不同认知障碍的阿尔茨海默病患者睡眠特点分析[A];中华医学会精神病学分会第九次全国学术会议论文集[C];2011年

5 金元;曹红;葛仁山;;Nestorone和黄体酮对阿尔茨海默病大鼠记忆的影响及机制[A];2009年浙江省麻醉学学术会议论文汇编[C];2009年

6 庞丽;姚建莉;李海红;曹震;徐志峰;尤克增;陈耀文;吴仁华;;9.4T离体型核磁共振频谱对阿尔茨海默病海马谷氨酸变化的研究[A];中华医学会第16次全国放射学学术大会论文汇编[C];2009年

7 潘小玲;王刚;崔佩菁;王瑛;马建芳;任汝静;邓钰蕾;徐玮;汤荟冬;陈生弟;;GAB2基因多态性与阿尔茨海默病的相关性研究[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年

8 丛琳;;调控ADAM9基因表达的启动子区多态性对散发性阿尔茨海默病的保护作用[A];2011全国老年痴呆与衰老相关疾病学术会议第三届山东省神经内科医师（学术）论坛论文汇编[C];2011年

9 郭喆;张锦明;姚树林;贾建军;尹大一;田嘉禾;;阿尔茨海默病~(11)C-PIBPET显像临床研究[A];第四届全国中青年核医学学术会议论文汇编[C];2008年

10 吴明德;齐莉容;;102例阿尔茨海默病人的血脂水平分析[A];第四届全国血脂分析与临床学术研讨会暨第九届全国脂蛋白学术会议论文汇编[C];2008年

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1 阿胜　编译;[N];医药经济报;2009年

2 王延江;[N];健康报;2011年

3 李勇;[N];中国医药报;2011年

4 记者　钱铮;[N];新华每日电讯;2006年

5 ;[N];医药经济报;2005年

6 余志平;[N];中国医药报;2004年

7 李文;[N];中国医药报;2004年

8 王迪;[N];医药经济报;2007年

9 编译 伊遥;[N];中国医药报;2011年

10 闻新;[N];医药经济报;2006年

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1 赵长安;铝致阿尔茨海默病大鼠的效应及补肾填精方的防治机制[D];河北医科大学;2002年

2 黄艳红;植物雌激素对绝经后阿尔茨海默病神经保护机制的研究[D];第四军医大学;2004年

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4 宋阳;核磁共振追踪外源性的标记细胞在阿尔茨海默病的细胞治疗中的应用[D];中国医科大学;2006年

5 尹刚;PI3K/AKT信号通路在AD发病中的作用[D];华中科技大学;2011年

6 杜红坚;阿尔茨海默病载脂蛋白E基因多态性及神经电生理研究[D];天津医科大学;2002年

7 佡剑非;Aβ-AD动物模型建立及NGF治疗的实验研究[D];中国医科大学;2005年

8 张葳;雌激素对去卵巢大鼠中枢神经系统保护机制的研究[D];吉林大学;2005年

9 周志昆;中药复方养寿丹对阿尔茨海默病模型海马区神经免疫调节机制研究[D];广州中医药大学;2005年

10 李旻;NGF对表达突变型APP的PC12细胞作用机理的实验研究[D];中南大学;2006年

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2 何国军;阿尔茨海默病和血管性痴呆的颅脑核磁共振定量研究[D];第一军医大学;2004年

3 赵琳;维生素E和川芎嗪防治化学药物诱导的阿尔茨海默病的实验研究[D];中国医科大学;2006年

4 庄莹;人参皂苷Rg2对阿尔茨海默病大鼠大脑保护作用的研究[D];吉林大学;2007年

5 肖飞;广东海风藤提取物HS_2对阿尔茨海默病模型的药效学研究[D];暨南大学;2003年

6 李进;功能磁共振成像对阿尔茨海默病相关认知功能障碍及中药防治的研究进展[D];北京中医药大学;2007年

7 唐翠松;轻度认知障碍局部脑代谢的~1H-MRS分析[D];苏州大学;2008年

8 胡薇;小鼠慢性酒精中毒脑神经细胞APP和Aβ蛋白的表达[D];中国医科大学;2009年

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10 张晓裕;阿尔茨海默病造模条件的优化及去痴灵对该模型的作用[D];暨南大学;2010年

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