淀粉样前体蛋白的突变在Aβ形成过程中作用研究

发布时间：2016-12-17 18:32

  本文关键词：淀粉样前体蛋白的突变在Aβ形成过程中作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

《北京理工大学》 2015年

淀粉样前体蛋白的突变在Aβ形成过程中作用研究

张欢欢  

【摘要】：阿尔茨海默症是当今威胁老年人身体健康的主要疾病之一,目前还没有很好的治疗方法和药物。Aβ是阿尔茨海默症患者脑内神经炎性老年斑的主要成分。Aβ短肽的产生是淀粉样前体蛋白(Amyloid Precursor Protein,APP)依次被β-分泌酶和γ-分泌酶水解而形成的,据研究Aβ(1-40,1-38)和Aβ(1-42,3-40)较其他形式Aβ更具有淀粉样蛋白毒性。研究表明,APP基因突变是家族性阿尔茨海默症的遗传因素之一,对APP基因突变的深入将有助于加深对阿尔茨海默症致病相关通路的认识。本课题选取5个APP单核苷酸突变类型:A673T、A673V、E682K、E693G、E693Q,采用重叠延伸PCR的方法获得5个APP突变基因,双酶切后将突变基因与pcDNA4质粒连接,构建重组真核表达质粒。以pcDNA4为对照组,分别将pcDNA4/APP WT-mycHis或pcDNA4/APP-mycHis突变质粒与pcDNA4/BACE1-mycHis瞬时转染入HEK293细胞,进行突变基因的表达。采用Western Blot的方法检测转染APP突变质粒后APP水解切割过程相关蛋白水平,包括APP蛋白、C99片段等,采用LC-MS/MS检测Aβ产生过程中生成的三肽、四肽。结果发现,与APP野生型相比,A673V、E682K、E693Q三种突变均使APP蛋白水解量增多;虽然相比于APP野生型,E682K、E693G两种突变均使C99片段的生成量提高,但A673T突变能使C99与C83片段生成量的比率明显降低。ELISA结果显示A673T组Aβ42水平明显低于APP野生型,其他4个突变组Aβ42水平均高于APP野生型;而A673T组Aβ40水平与APP野生型相比却无明显差异,其他4个突变组Aβ40水平均低于APP野生型;Aβ42/Aβ40比率显示,A673T组Aβ42/Aβ40较APP野生型明显降低,而其他四个突变组Aβ42/Aβ40比率均明显高于APP野生型。LC-MS/MS质谱结果显示A673T组Aβ40和Aβ42水平均降低;A673V和E693Q两组Aβ40水平降低,Aβ42水平升高;E682K组Aβ40和Aβ42水平均升高;E693G组Aβ40水平升高,Aβ42水平降低。综合研究结果,A673T突变能通过调控毒性Aβ生成量减少,从而对阿尔茨海默症起到一定保护作用。其他4种突变均能够促进APP蛋白水解产生Aβ42,这对理解阿尔茨海默症病理发生APP机制增加了实验数据支持。

【关键词】：
【学位授予单位】：北京理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R749.16
【目录】：

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