34c在快速老化小鼠海马组织中的表达及其靶基因的初步鉴定
本文关键词:氧化应激诱导小鼠海马神经元microRNA表达谱的改变及验证,由笔耕文化传播整理发布。
《河北医科大学》 2013年
miR-34c在快速老化小鼠海马组织中的表达及其靶基因的初步鉴定
于文君
【摘要】:目的:阿尔茨海默症(Alzheimer’s Disease, AD)是中枢神经系统最常见的一种神经系统退行性疾病,主要表现为渐进性记忆障碍、认知功能障碍、人格改变及语言障碍等神经精神症状,严重影响社会交往、就业与生活质量,给个人、家庭和社会带来沉重负担。AD的病因和发病机制十分复杂,至今尚不完全清楚。目前存在多种学说,如氧化应激学说、Aβ级联学说、Tau蛋白假说、线粒体功能障碍学说、基因突变学说和自噬功能失调学说等。miRNAs是体内重要的一种内源性非编码小RNA,通过与mRNA3'-UTR结合发挥转录后调节作用,在人体大约有20-30%的基因是受miRNA调控的。近年来,研究表明,miR-18b、 miR-325、miR-615等多个miRNAs在AD的发生、发展过程中发挥的重要调节作用。尽管如此,失调的miRNAs在AD发生发展中的作用机制尚不完全明确,是当前本领域研究的热点问题。本研究通过对快速老化小鼠(Senescence AcceleratedMouse-Prone/8, SAMP8)海马组织中miRNAs的表达谱进行分析,结合生物信息学、Real-time PCR和Western blot等方法,筛选并确定目标miRNAs及其靶基因,进一步采用荧光素酶实验观察miR-34c对其靶基因突触结合蛋白(Synaptotagmin-1,syt1)的负向调控作用。为阐明miR-34c在AD发生发展过程中的作用以及开发以miRNAs为靶点的药物提供了新的思路。 方法:①法实验动物:封闭群清洁级快速老化亚系SAMP8及抗快速老化亚系SAMR1(Senescence accelerated Mouse-Resistant/1, SAMR1)。②②SAMRn表达谱的检测:采用miRNA基因芯片技术检测SAMP8和正常同龄对照SAMR1鼠海马组织中miRNA表达谱的改变情况。③③利用生物信息学方法进行KEGG分析,预测差异性表达的miRNAs可能参与的信号通路。④能差异性表达miRNA的验证:通过Real-time PCR验证目标miRNAmiR-34c在3月龄SAMP8和同龄对照SAMR1小鼠海马组织中的表达;进一步通过Real-time PCR检测miR-34c在3月龄SAMR1小鼠脑、心、肝、肾等组织的表达和3,6和9月龄SAMP8和同龄对照SAMR1小鼠海马组织中的表达及增龄性改变。⑤增利用生物信息学方法进行GO分析,预测miR-34c的靶基因可能的生物功能。⑥靶基因的预测及验证:利用miRNA靶基因数据库Targetsan6.2和Pictar、miRanda、RNA22、PITA综合预测miR-34c的靶基因,通过Real-time PCR检测3、6和9月龄SAMP8小鼠和正常同龄对照SAMR1小鼠海马组织中靶基因mRNA水平的表达,再分别通过Westernblot和免疫组化的方法对SAMP8和同龄对照SAMR1小鼠海马组织中靶基因蛋白的表达和定位进行分析。⑦行荧光素酶实验:最后通过构建靶基因3'-UTR荧光素酶报告载体,与miR-34c前体序列或抑制物共同转染HEK-293细胞,通过双荧光素酶检测系统检测荧光素酶活性。⑧胞统计方法:所有数据采用x|-±s表示。用SPSS13.0软件进行数据处理,采用方差分析和独立样本t检验进行统计学分析,以P 0.05为有统计学意义。 结果:①果miRNA芯片结果:与正常同龄对照SAMR1相比,SAMP8海马组织中表达差异在1.5倍以上的miRNAs有15个,其中7个表达下调,8个表达上调,且以miR-34c表达上调倍数最高,为2.52倍。②。对差异性表达的miRNAs进行的KEGG结果提示:差异表达的miRNAs的靶基因可能参与机体神经营养因子信号通路、轴突导向和突触囊泡循环等信号通路,以及神经元突触的形成过程。③靶Real-time PCR检测显示,与同龄正常对照组SAMR1小鼠相比,3月龄SAMP8小鼠海马组织中miR-34c表达增高(P0.05),与芯片结果一致;miR-34c在小鼠海马和脑皮质中的相对表达量明显高于心、肝、肾组织(P 0.05);与正常同龄对照组SAMR1相比,3,6和9月龄SAMP8小鼠海马组织中miR-34c表达均显著增高(P 0.05),且在SAMP8组呈增龄性表达增高(P 0.05)。④④0.分析结果提示,,miR-34c的靶基因可能参与轴突导向、神经系统的发生等过程,并且参与突触结构的组成过程。⑤软件预测miR-34c靶基因为突触结合蛋白1(Synaptotagmin1,syt1),Real-time PCR检测3,6和9月龄SAMR1和SAMP8海马组织中syt1mRNA水平随着月龄的增加而增高(P 0.05)。⑥Western blot检测结果显示,与正常同龄对照组SAMR1相比,3,6和9月龄SAMP8小鼠海马组织中SYT1蛋白水平明显下调,且 呈增龄性下降(P 0.05)。免疫组化结果显示,SYT1蛋白主要表达在小鼠海马组织的CA3区,DG区和CA1区几乎没有阳性表达。⑦达双荧光素酶活性检测结果显示,与阴性对照组相比,转染miR-34c前体组,荧光素酶活性明显减低,转染miR-34c抑制物组荧光素酶活性增高(P 0.05)。 结论:①论SAMP8小鼠海马组织中多种miRNAs表达失调,可能通过神经营养因子信号通路、轴突导向和突触囊泡循环通路参与脑老化及神经系统退行疾病的发病过程。②行miR-34c可抑制其靶基因syt1蛋白的翻译在AD发生发展过程中发挥重要作用。
【关键词】:
【学位授予单位】:河北医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R749.16
【目录】:
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1 付剑亮;邵福源;;阿尔茨海默病发病机制研究进展[J];世界临床药物;2010年07期
【共引文献】
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1 赵烨;徐美华;董文心;;阿尔茨海默病药物治疗进展[J];世界临床药物;2011年10期
2 赵绪韬;傅毅;董文心;;β淀粉样蛋白靶向药物治疗阿尔茨海默病的研究进展[J];世界临床药物;2013年01期
3 章磊;徐兰霞;徐建国;张福利;郭振荣;;四种治疗阿尔茨海默病药物的比较评价[J];世界临床药物;2013年01期
4 柳亚锋;李江平;王剑;;脉血康胶囊联合高压氧舱治疗阿尔茨海默病疗效观察[J];黑龙江医学;2011年07期
5 秦亚莉;张俊龙;郭蕾;;将代谢组学技术用于阿尔茨海默病中医证候研究[J];辽宁中医药大学学报;2013年08期
6 刘辰庚;王培昌;;microRNA对淀粉样前体蛋白调控的研究进展[J];现代生物医学进展;2012年25期
7 樊睿;朱昭琼;;海马蛋白与学习记忆的研究[J];现代医药卫生;2011年24期
8 魏铁花;李宝龙;刘旭;贾博宇;周忠光;尹丽颖;;通天草提取物对拟阿尔茨海默氏病模型大鼠学习记忆能力及其海马区组织相关蛋白表达的影响[J];吉林中医药;2013年02期
9 张琳;赵苗;袁杰利;;阿尔茨海默病及其微生态防治的相关研究进展[J];中国微生态学杂志;2013年07期
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1 俞海波;EB病毒感染对microRNA-203的表达影响及其相互作用是鼻咽癌发病学的重要机制[D];中南大学;2012年
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1 宋柱文;薄层色谱生物自显影新方法的建立及荷叶碱衍生物抗乙酰胆碱酯酶活性评价[D];兰州理工大学;2011年
2 董江涛;γ-分泌酶抑制剂LY411575类似物的合成[D];山东大学;2011年
3 李伟庆;Wnt/β-catein通路对麦芽酚铝致PC-12细胞凋亡的影响[D];山西医科大学;2012年
4 吕传峰;槲皮素对记忆巩固障碍及帕金森氏病模型小鼠保护作用的研究[D];吉林大学;2012年
5 苏琦;石杉碱甲改善复合型AD大鼠模型行为学的可能机制[D];苏州大学;2012年
6 牛静亚;氧化应激诱导小鼠海马神经元microRNA表达谱的改变及验证[D];河北医科大学;2012年
7 王艳;天麻素对脂多糖诱导PC12细胞氧化应激保护作用的研究[D];昆明医科大学;2012年
8 辛利娟;三种传统药用植物化学成分及石蒜生物碱活性研究[D];中央民族大学;2012年
9 王晓兰;艾灸预处理对阿尔茨海默病模型大鼠海马CA1区NGF和BDNF表达的影响[D];湖北中医药大学;2012年
10 高怀云;电针对老年痴呆大鼠空间记忆能力影响的研究[D];成都中医药大学;2012年
【二级参考文献】
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1 李焱;;中枢胰岛素抵抗与阿尔茨海默病发病关系的认识[J];诊断学理论与实践;2009年03期
2 唐智;单可人;官志忠;;神经型尼古丁乙酰胆碱受体在阿尔茨海默病发病机制中的作用[J];中国老年学杂志;2009年12期
3 曹霞飞;让蔚清;;炎性反应与阿尔茨海默病[J];中国老年学杂志;2009年19期
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1 郝巧玲,吕斌,周宜开,程光明;生物发光法快速检测细胞内三磷酸腺苷[J];华中科技大学学报(医学版);2005年01期
2 尉继征;熊伟;祝庆余;;生物发光技术在活体成像检测中的应用[J];医学分子生物学杂志;2006年03期
3 樊粉霞;卫玮;柳惠图;张伟;;紫龙金对BGC-823细胞增殖的抑制作用及对p16~(INK4a)启动子活性的影响[J];北京师范大学学报(自然科学版);2010年01期
4 张华,供田洋,大村智;真菌KS-1995产生的增加LDLR基因表达的活性物质的研究[J];中国抗生素杂志;1998年04期
5 李淑德,许国铭,李兆申;鸡螺杆菌诱导胃上皮细胞白细胞介素8转录及病理意义[J];胃肠病学;2002年02期
6 黄瑞燕,许丽艳,许晓玲,方栩佳,陈波,牛永东,李恩民;NGAL基因5’侧翼区启动子区的克隆与鉴定[J];肿瘤防治研究;2005年06期
7 陈涛;Bhatta SK;刘建平;林浩铭;万云乐;陈翔;罗兴喜;区庆嘉;;应用生物荧光法检测三磷酸腺苷评估肝细胞功能储备(英文)[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年42期
8 余光创;秦宜德;;miRNA靶基因计算分析新方法及其应用研究[J];安徽医科大学学报;2011年05期
9 孟希亭;林晨;梅佳;王海娟;马飞;张金龙;张颖;钱海利;;活体成像系统检测携荧光素酶增殖缺陷型腺病毒在小鼠体内的表达和分布[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2011年04期
10 王小红,王升启,李梦东,朱宝珍;HCV 5'NCR片段调控荧光素酶表达质粒的构建及其在HepG2细胞中的表达[J];中华微生物学和免疫学杂志;1999年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张焕容;肖驰;曹三杰;文心田;;伪狂犬病病毒、猪细小病毒和流行性乙型脑炎病毒检测基因芯片的构建及检测技术研究[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集(上)[C];2005年
2 沈鹤;赵书红;樊斌;;一个miR-29靶基因的预测及验证[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年
3 汪世臣;;拟南芥转录因子DREBs靶基因的计算预测[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编(2004-2008)[C];2008年
4 王华;徐德祥;李祥云;张程;陈远华;宁萑;;孕鼠接触细菌脂多糖对胎肝孕烷X受体及其靶基因cyp3a11的调控作用[A];中国毒理学会第二届全国中青年学者科技论坛会议论文集[C];2007年
5 李一明;李维卿;卢亦成;;miR-21通过靶定LRRFIP1调节胶质母细胞瘤对VM-26的敏感性[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年
6 刘昭廷;王强;孟安明;;基因组水平上受斑马鱼Smad2调控的靶基因[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
7 方常鸣;徐永华;;转录因子c-MYC下游靶基因的克隆及功能研究[A];中国细胞生物学学会第七次会议论文摘要汇编[C];1999年
8 钟华;杨爽;陈芳源;王海嵘;钟济华;王利民;;体外全反式维甲酸或三氧化二砷处理NB4细胞microRNA表达的变化[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
9 王蓓蕾;王祥瑞;;脂多糖对THP-1细胞HIF-1及其靶基因的表达影响[A];2008年第七次华东六省一市麻醉学学术会议暨浙江省麻醉学术年会论文汇编(下册)[C];2008年
10 黄耀熊;程木华;;拉曼散射研究纳米介导~(125)I-AFPasON对活细胞靶基因的作用[A];第七届全国光生物学学术会议论文摘要集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张中桥;[N];中国医药报;2006年
2 一山;[N];中国医药报;2007年
3 耿挺;[N];上海科技报;2007年
4 本报特约撰稿人 陆志城;[N];医药经济报;2005年
5 香港麦迪信医学出版公司 供稿;[N];医药经济报;2002年
6 冯瑶;[N];中国中医药报;2006年
7 卢菁;[N];新华每日电讯;2008年
8 ;[N];健康报;2008年
9 记者赵亚萍;[N];科技日报;2002年
10 孟小捷;[N];健康报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘博;miR-126的表达谱分析及其功能的初步研究[D];第二军医大学;2009年
2 钱琤;原发性胆汁性肝硬化患者外周血T细胞microRNA表达谱及其调控机制的研究[D];第二军医大学;2008年
3 宋长年;枳和柑橘microRNA及其靶基因的识别、鉴定与表达分析[D];南京农业大学;2011年
4 闵敏;MicroRNA-155通过调节转录因子FOXO3a在溃疡性结肠炎中的作用[D];中国人民解放军军医进修学院;2012年
5 刘凌晓;基因干扰肝肠钙黏附蛋白联合p53分子靶向治疗肝癌的实验研究[D];复旦大学;2008年
6 张瑜;MicroRNA-128在神经胶质瘤中的生物学功能研究[D];中国协和医科大学;2009年
7 于新凤;转录因子c-Jun/AP-1对食管鳞癌分化相关基因转录调控机理研究[D];中国协和医科大学;2006年
8 郭艳;喉癌中S100A8基因调控机制研究[D];中国医科大学;2009年
9 黄朝晖;血浆microRNA用于结直肠癌诊断的研究及miR-95促进结直肠癌生长的机制研究[D];复旦大学;2010年
10 夏琳;microRNA在胃癌多药耐药中的作用及分子机制[D];第四军医大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 于文君;miR-34c在快速老化小鼠海马组织中的表达及其靶基因的初步鉴定[D];河北医科大学;2013年
2 刘超;MiR-34c在奶山羊雄性生殖干细胞增殖分化过程中的作用[D];西北农林科技大学;2012年
3 童玉成;玉米脱水应答元件结合因子靶基因的全基因组分析[D];四川农业大学;2010年
4 付笑男;miR-34c抑制脑胶质瘤生长的分子机制[D];华东师范大学;2010年
5 孙广杰;牛腺垂体倾向表达miR-7与miR-375靶基因的识别[D];吉林大学;2013年
6 吴顺泉;多个microRNAs通过直接作用于p21的3'UTR调控p21基因的表达[D];福建医科大学;2010年
7 王礼翠;HCV丝氨酸蛋白酶活性监测体系的建立[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
8 张姗姗;miR-34c在小鼠胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化过程中的作用[D];西北农林科技大学;2011年
9 于汪洋;延边黄牛垂体miR-26b的表达规律及其靶基因EphA2的识别[D];吉林大学;2012年
10 王燕;miR-34c调控TGIF_2在HBV相关肝细胞肝癌中的作用研究[D];山东大学;2012年
本文关键词:氧化应激诱导小鼠海马神经元microRNA表达谱的改变及验证,由笔耕文化传播整理发布。
本文编号:244393
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