阿尔茨海默病的胞吞机制和风险因素研究

发布时间：2017-04-07 15:10

  本文关键词：阿尔茨海默病的胞吞机制和风险因素研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分Clathrin、PICALM在早期阿尔茨海默病细胞模型中表达改变 目的：近来研究显示阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）与网格蛋白介导的胞吞途径（Clathrin-mediated endocytosis，CME）密切相关。在AD中，CME相关蛋白的表达改变。早期AD的病理改变如Aβ（amyloid β peptide）产生、N-甲基-D-天冬氨酸受体表达很可能与CME功能异常相关。因此本部分的目的在于建立阿尔茨海默病的皮层神经元模型，研究CME的改变，为探讨CME途径参与阿尔茨海默病的调控机制。 方法：首先优化培养技术，培养新生SD乳鼠皮层神经元，，获得高纯度的原代神经元细胞。然后以Aβ1-42寡聚体建立AD细胞模型，最后采用逆转录酶-聚合酶链锁反应(Reverse Transcription-Polymerase ChainReaction，RT-PCR)、细胞免疫荧光技术及免疫印记（Western blotting，WB）从转录和翻译两个水平探测AD细胞模型中CME关键蛋白网格蛋白（clathrin）、磷脂酰肌醇连接网格蛋白组装蛋白（Phosphatidylinositolbinding clathrin assembly protein，PICALM）的表达情况。 结果：与正常对照组相比，1μM组（1μM Aβ1-42寡聚体处理1h）皮层神经元形态和数量无明显改变、代谢率下降（p＜0.05）；而5μM组（5μM Aβ1-42寡聚体处理1h）凋亡明显，代谢率明显下降（p＜0.01）。因此选择1μM作为干预，建立AD细胞模型。RT-PCR、WB及细胞免疫荧光结果显示AD细胞模型中calthrin蛋白及mRNA表达水平明显升高（p＜0.05），PICALM蛋白及mRNA表达改变并不明显（p＞0.05）。 结论：Clathrin、PICALM是CME关键蛋白。在神经细胞中clathrin借助PICALM锚定细胞膜聚集内陷形成CME的起始结构网格蛋白被膜囊泡。因此clathrin与PICALM非协同性改变很可能引起CME功能障碍，最终导致AD中多种细胞功能的异常。 第二部分Chitinase1在APP/PS1鼠中表达增加 目的：文献报道AD患者脑脊液、外周血中壳多糖酶1（chitinase1）表达增加。联合chitinase1、Aβ及Tau蛋白诊断AD，准确率高达91%，因此有人认为chitinase1是下一个有力的AD诊断指标。然而AD中chitinase1作用尚不明晰。因此我们设计实验检查不同临床阶段APP/PS1双转基因鼠chitinase1的表达，探讨它在AD的潜在作用。 方法：Morris水迷宫检测4月龄、12月龄APP/PS1双转基因鼠及野生型（wild type，WT）鼠的学习记忆能力。酶联免疫特异性测定法（enzyme-linked immunospecific assay，ELISA）、实时定量反转录酶-聚合酶链锁反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）从转录和翻译两个水平检测不同月龄APP/PS1双转基因鼠及WT鼠皮层chitinase1的表达。 结果：Morris水迷宫显示隐藏平台期12月龄APP/PS1组较WT组逃避潜伏期明显延长（P＜0.05），4月龄组间无差异（P＞0.05）；空间搜索期WT组在中心区域路径百分比更高（P＜0.05），APP/PS1组在边缘区域路径百分比更高（P＜0.05）。ELISA法和qRT-PCR检测chitinase1蛋白与mRNA水平显示12月龄APP/PS1组较12月龄WT组、4月龄WT组、4月龄APP/PS1组明显增加（P＜0.05），而后三组之间chitinase1表达无明显差异（P＞0.05）。 结论：4月龄APP/PS1鼠有空间学习障碍，无空间记忆障碍；12月龄APP/PS1鼠的空间学习记忆均下降。因此前者处于AD早期认知下降不明显，后者处于AD中晚期认知障碍明显。Chitinase1的表达在高低月龄的WT组间无差异，而在高龄APP/PS1明显增高。这提示chitinase1与年龄无关，与认知降低有关，因此它很可能是认知障碍的一种标志。 第三部分认知障碍与营养不良相关性研究 目的：认知障碍是困扰老年人的常见症状。严重影响老年人生活质量，加重家庭及社会的经济负担。然而目前的医疗手段仍无法治愈，治疗以改善症状、延缓进餐为主。因此掌握认知障碍的危险因素对于它的防治异常的重要。 方法：2011年4月至2012年10月，横断面研究重庆医科大学附属第一医院老年病科及重庆市江北区南桥寺社区服务中心老年患者（年龄≥60岁）的一般健康问题。老年人综合健康评估量表包括问卷调查、实验室及体格检查。所有的调查及操作均由专业培训医师完成。 结果：平均年龄73.1±8.0岁，其中男性占43.9%，MNA-SF平均分数为12.5（SD=1.9，4-14）,MMSE平均分数为27.1（SD=2.1，10-30）。营养不良率和营养不良风险率分别为3.2%，19.3%,认知障碍率为18.8%。统计分析显示轻度认知障碍与营养状态相关。常吃鱼类降低营养不良的风险。 结论：与营养良好的老年人相比，营养不良的患者认知能力更差。因此维持老年人良好的营养状态，对于延缓认知减退可能有一定的帮助。多吃鱼类是一个不错的选择。不过这还需要进一步的研究证实。
【关键词】：阿尔茨海默病 阿尔茨海默病细胞模型 网格蛋白介导胞吞途径 clathrin PICALM 阿尔茨海默病 APP/PS1双转基因鼠 认知能力 chitinase1 老年人健康综合评估 营养状况 认知能力
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.16
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-6
• 摘要6-11
• ABSTRACT11-17
• 前言17-19
• 第一部分 Clathrin、PICALM 在阿尔茨海默病细胞模型中的表达改变19-41
• 1 材料与方法19-27
• 2 结果27-33
• 3 讨论33-40
• 4 小结40-41
• 第二部分 Chitinase 1 在 APP/PS1 鼠中表达增加41-51
• 1 材料与方法41-44
• 2 结果44-48
• 3 讨论48-50
• 4 小结50-51
• 第三部分 认知障碍与营养不良相关性研究51-61
• 1 研究方法51-53
• 2 结果53-58
• 3 讨论58-60
• 4 结论60-61
• 参考文献61-66
• 文献综述66-74
• 参考文献71-74
• 致谢74-75
• 攻读硕士期间发表的论文75-76

【参考文献】

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1 冷幸生;邵蔚;;1187名老年人健康检查情况分析[J];社区医学杂志;2008年22期

2 林红,张拓红,杨辉,王成彪,段立嵘,张晓萍,龚广才;北京市895名老年人慢性病现状及其影响因素分析[J];中国慢性病预防与控制;2002年06期

  本文关键词：阿尔茨海默病的胞吞机制和风险因素研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：290704