抗AβN端表位单克隆抗体的体外保护作用及其在Aβ检测中的初步应用

发布时间：2023-05-07 07:24

　　阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是一种比较常见的衰老相关的神经退行性疾病,目前尚无特异的治疗和诊断方法。AD的主要病理特征是细胞外淀粉样肽(amyloidβ-peptide, Ap)沉积形成老年斑(senile plaque, SP)、细胞内tau蛋白积聚形成的神经纤维缠结(neurofibrillary tangle, NFT)以及神经元丢失及脑萎缩。目前认为,Aβ异常折叠和聚集是其神经元损伤作用的主要始动环节,形成的Aβ寡聚体主要以C端肽为核心,而将N端肽暴露于表面。研究表明,针对Aβ不同肽段的单抗在AD治疗和早期诊断中具有各自的优势,而针对AβN端的单抗通常亲和力较高,比较适合用于AD的诊断和治疗研究。 本课题主要研究了具有N端表位的抗Aβ单抗体外细胞保护作用以及此类抗体在AD检测中的初步应用。 一、针对N端表位的抗Aβ单克隆抗体的体外保护作用 首先,选择反式视黄酸(Trans Retinoic Acid, TRA)作为分化诱导剂,用可溶性Aβ寡聚体引起神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤,在倒置显微镜下观察细胞形态,并用MTT法测定细胞活力,建立较稳...

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

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致谢
中文摘要
ABSTRACT
1 引言
2 抗Aβ N端表位单抗的体外保护作用
    2.1 实验材料与方法
        2.1.1 实验材料与仪器
        2.1.2 细胞培养与诱导分化
        2.1.3 Aβ寡聚体的细胞毒性实验
        2.1.4 抗Aβ单抗体外细胞保护实验
    2.2 实验结果
        2.2.1 反式视黄酸(TRA)诱导时间的确定
        2.2.2 Aβ寡聚体的细胞毒性具有剂量依赖性
        2.2.3 针对N端表位的抗Aβ单抗体外细胞保护实验
3 抗AβN端表位单抗在Aβ检测中的初步应用
    3.1 实验材料与方法
        3.1.1 实验材料与仪器
        3.1.2 标准品的制备
        3.1.3 3株抗体的大量制备与纯化
        3.1.4 用生物素标记抗Aβ抗体
        3.1.5 检测生物素标记抗体的灵敏度
        3.1.6 确定包被抗体与检测抗体的最佳工作浓度
        3.1.7 比较不同包被抗体对反应系统的影响
        3.1.8 Aβ42寡聚体标准品检测系统工作曲线的建立
        3.1.9 测定AD患者血浆Aβ的含量
    3.2 实验结果
        3.2.1 Aβ寡聚体制备的效果
        3.2.2 纯化后单克隆抗体的纯度检测
        3.2.3 生物素标记抗体复合物制备效果
        3.2.4 生物素标记对检测抗体灵敏度的影响
        3.2.5 用棋盘滴定法确定包被抗体与捕获抗体的最佳工作浓度
        3.2.6 Aβ42寡聚体标准品检测系统工作曲线的建立及灵敏度检测
        3.2.7 比较不同包被抗体对检测系统的影响
        3.2.8 测定AD患者血浆中Aβ的含量
4 讨论
5 结论
参考文献
附录A
中英文缩略词表
作者简历
学位论文数据集



本文编号：3810549