NT3通过激活C/EBPβ对骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的实验研究

发布时间：2024-03-03 22:43

　　目的:本研究采用慢病毒携带NT-3(neurotrophin-3)基因转染的骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),探讨NT-3修饰BMSCs移植阿尔茨海默病脑内对认知功能和记忆力的影响,以及海马区神经功能修复及再生的影响。为进一步BMSCs基因治疗阿尔茨海默病提供技术和理论支持。方法:1.取SD大鼠股骨或胫骨骨髓间充质干细胞,经密度梯度离心法分离后进行体外培养,倒置显微镜下观察BMSCs形态及生长,通过传代纯化和扩增。取第三代BMSCs流式细胞术鉴定骨髓MSCs表面的抗体CD44、CD90、CD34和CD45表达。2.构建并制备大鼠NT-3过表达慢病毒及对照慢病毒,转染BMSCs细胞,48 h后,Western Blot检测NT-3表达情况。将NT-3过表达及干扰慢病毒转染的BMSCs细胞与乳鼠神经元细胞共培养,免疫荧光检测NSE表达情况。MTT检测共培养24 h、48 h、72 h细胞增殖情况;实时荧光定量PCR检测C/EBPβmRNA表达情况;Western Blot检测C/EBPβ蛋白表达情况。3.采用双侧海马注射A...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
中英文缩写词表
第一章 前言
第二章 材料
    2.1 实验动物
    2.2 主要实验仪器设备
    2.3 主要试剂
第三章 实验方法
    3.1 骨髓间充质干细胞（BMSCs）的分离、培养及纯化
    3.2 BMSCs的鉴定
    3.3 NT-3 过表达慢病毒载体、NT-3 沉默慢病毒构建及细胞转染
    3.4 共培养模拟体内微环境诱导BMSCs分化为神经元
    3.5 免疫荧光染色检测分化为神经元
    3.6 MTT检测细胞活力
    3.7 Real-time PCR检测C/EBP β mRNA表达
    3.8 Western Blot检测
    3.9 制作注射Aβ受体阻断剂诱导的大鼠痴呆模型
    3.10 双侧海马区移植BMSCs
    3.11 移植BMSCs1个月后进行水迷宫实验
    3.12 Western Blot检测海马NT-3 和C/EBPβ表达
    3.13 免疫荧光组织化学实验
    3.14 统计学分析
第四章 结果
    4.1 BMSCs的分离、传代培养结鉴定结果
        4.1.1 BMSCs分离、传代培养
        4.1.2 流式细胞仪鉴定结果
    4.2 慢病毒介导的NT-3 基因转染后在BMSCs中的过表达
    4.3 共培养后免疫荧光染色结果
    4.4 MTT检测结果
    4.5 Real-time PCR检测C/EBP β mRNA表达变化
    4.6 Western blot检测C/EBP β蛋白表达变化
    4.7 BMSCs移植对AD大鼠认知功能的影响
    4.8 移植NT-3 基因修饰的BMSCs后大鼠海马中C/EBPβ表达
    4.9 移植NT-3 基因修饰的BMSCs对海马组织中神经形成的影响
第五章 讨论
第六章 结论
参考文献
致谢
附录



本文编号：3918465