核受体RXRα/Nur77的表达及亚细胞定位对神经元凋亡的影响

发布时间：2024-06-05 05:56

　　目的：探讨外源Aβ，及大脑病理性增加Aβ（AD模拟）对核受体RXRα、Nur77的表达和亚细胞定位的影响，RXRα、Nur77表达和亚细胞定位对神经元凋亡的影响。 方法：以用Aβ25-35和ddH2O分别处理的N2a细胞，AD小鼠与对照小鼠的大脑皮层和海马为研究对象。PCR结合免疫组化方法鉴定AD小鼠是否模拟成功。首先，在基因水平上应用实时荧光RT-PCR方法检测N2a细胞和皮层、海马中RXRα、Nur77的mRNA表达水平。第二，在蛋白含量水平上应用核质分离结合蛋白印记方法检测RXRα、Nur77蛋白总含量以及在细胞核与细胞质中的含量。第三，在蛋白定位上应用免疫荧光对细胞爬片和大脑冰冻组织切片进行定位染色，观察N2a细胞与皮层、海马细胞中RXRα、Nur77的亚细胞定位；最后，细胞凋亡的检测，流式细胞仪检测N2a细胞凋亡情况，DAPI染色观察皮层、海马细胞的凋亡。 结果：N2a细胞经Aβ处理24h后，RXRαmRNA表达水平增加了16.47%，Nur77mRNA表达水平无明显变化；RXRα、Nur77总蛋白量变化无明显差异，但RXRα、Nur77在细胞质中的含量与分布增多，RXRα与...

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图2大脑皮层与海马免疫组化染色结果

图2大脑皮层与海马免疫组化染色结果荧光定量PCR检测RXRα/Nur77的mRNA转录水平荧光RT-PCR方法检测Aβ25-35短肽处理后的N2a细胞，AD马组织中RXRα与Nur77基因表达水平的变化。结果显示，A的N2a细胞对比于未处....

图3荧光PCR扩增曲线A：细胞RXRα、Nur77与GAPDH基因荧光PCR扩增曲线；B：大脑皮层组织RXRα、Nur77与GAPDH基因荧光PCR扩增曲线；C：海马组织RXRα、Nur77与GAPDH基因荧光PCR扩增曲线

23图3荧光PCR扩增曲线A：细胞RXRα、Nur77与GAPDH基因荧光PCR扩增曲：大脑皮层组织RXRα、Nur77与GAPDH基因荧光PCR扩增曲线；C：海马组织Rur77与GAPDH基因荧光PCR扩增曲线。AB

图4引物对的溶解曲线A：RXRα溶解曲线B：Nur77溶解曲线C：GAPDH溶解曲线

图4引物对的溶解曲线A：RXRα溶解曲线B：Nur77溶解曲线C：GAPDH溶解曲线3.4RXRα与Nur77蛋白的WesternBlot实验结果利用WesternBlotting实验方法对N2a细胞和Aβ25-35处理的N2a细胞....

图5RXRα与Nur77蛋白的总蛋白含量A：N2a细胞Aβ25-35(-)与N2a细胞

海马的增加了2.58%，Nur77蛋白含量增加了3.53%，蛋白含量无明显变化，据单样本t检验得出P>0.05，统计差别无意义。如图6所示。AB

本文编号：3989750