纤溶系统在罗格列酮治疗博莱霉素诱导大鼠肺纤维化中的作用及其信号机制

发布时间：2017-03-23 06:20

  本文关键词：纤溶系统在罗格列酮治疗博莱霉素诱导大鼠肺纤维化中的作用及其信号机制，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景及目的:特发性肺纤维化(IPF),主要特点是肺上皮细胞的破坏损伤、异常组织的修复、成纤维细胞和纤维母细胞的过度增殖、细胞外基质(ECM)的沉积及肺结构变形,这些病变过程和纤维增生修复过程,最后导致肺纤维化,造成肺功能障碍和呼吸衰竭,产生严重的致死性后果。目前肺纤维化发病机制不明,有很高的发病率和死亡率,且目前缺乏有效的治疗。纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)是丝氨酸蛋白酶抑制剂,是纤溶系统活化的重要抑制剂,能抑制纤溶酶原激活物的活性,即抑制尿激酶型纤溶酶原激活物(u PA)和组织型纤溶酶原激活物(t PA)的活性,可以与玻连蛋白成分结合,使之成为细胞外基质(ECM)的一个成分。正常的肺泡内PAI-1与u PA表达平衡,肺泡分泌的u PA,可以清除产生的纤维蛋白,在肺损伤时,PAI-1增加,相反的u PA的表达减少,纤溶系统平衡失调,产生的过多的纤维蛋白不能降解,最终导致了肺纤维化。过氧化物酶体增殖活化受体γ(PPARγ)是一类核转绿因子,被配体激活后才能发挥生物学作用。罗格列酮(RSG)是人工合成的PPAR-γ配体。目前的相关文献表明,增强胰岛素敏感性、减少胰岛素抵抗是RSG的主要作用,主要用于糖尿病的治疗,此外罗格列酮有很强的抗炎作用,并能调节脂肪代谢促进脂肪。近年来,对PPAR-γ及其配体的研究的报道越来越多,已有罗格列酮治疗组织纤维化的报道。有报道有关于PPAR-γ激动剂罗格列酮在治疗肾脏纤维化中,PAI-1的表达被抑制;有研究报道PPARγ激动剂在治疗肺纤维化中起作用。但罗格列酮治疗肺纤维化的具体分子机制尚不明确,研究表明罗格列酮发挥对肺纤维化的治疗作用可能通过阻止成纤维细胞的增生、减轻炎症反应、减轻基底膜增厚程度、增加细胞凋亡转化和减轻细胞外基质沉积等多种机制实现。本实验中初步研究罗格列酮是否可以减轻肺纤维化程度,并初步研究罗格列酮治疗肺纤维化过程中对纤溶系统的影响及可能的机制。方法:Wistar健康雄性大鼠54只,体重120-130g,采用随机数字表法将实验动物随机分成3组,对照组(control组)、博来霉素(Bleomycin,BLM)B组、博莱霉素+罗格列酮组(B+R组),每组18只。10%水合氯醛(3ml/kg)腹腔内麻醉后,仰卧位固定,常规消毒颈部皮肤,行颈正中切口,分离组织,暴露气管,博莱霉素组、博莱霉素+罗格列酮组按5 mg/kg抽取BLM液0.2~0.3 m L(生理盐水溶解),穿刺并注入气管内,对照组注入0.2~0.3 m L等体积生理盐水。B+R组于造模24小时后罗格列酮3mg/kg.d灌胃,余2组灌入等量生理盐水。上述3组动物分别于第7、14、28天每组各处死6只。右肺中叶肺组织固定于4%多聚甲醛中,供组织学检查(HE染色观察组织学变化,Masson染色观察肺纤维化程度);右肺上叶于-80℃中保存,Real time-PCR法测定PAI-1、u PA及PPARγm RNA表达量;右肺下叶肺组织-80℃冰箱,Western blot测定磷酸化-丝氨酸激酶(P-AKT)蛋白表达量,肺泡炎和肺纤维化程度用Szapiel法病理分级。实验结果及数据资料采用Spss13.0软件进行统计学分析,P0.05表明有统计学意义。结果:1肺组织病理学分析:经博莱霉素造模后,可观察到博莱霉素组中7天、14天、28天肺泡炎症明显,HE染色Szapiel分级统计示较对照组有明显统计学差异(P0.05);在纤维化方面,博莱霉素组14天起纤维化开始明显,与对照组相比,14天、28天均较有明显统计学差异(P0.05),经罗格列酮灌胃治疗后,可观察到博莱霉素+罗格列酮组组7天、14天、28天肺泡炎及肺纤维化程度明显减轻,均较博莱霉素组有明显统计学差异(P0.05)。2 Real time PCR结果:7天、14天、28天博莱霉素组PAI-1 m RNA的表达明显增加,与对照组比较,差异有明显统计学意义(P0.05);经罗格列酮治疗后各时间点治疗组PAI-1m RNA表达明显减少,与博莱霉素组比较差异有统计学意义(P0.05)。7天、14天、28天B组u PA、PPARγm RNA的相对浓度较均较对照组明显减少,差异有统计学意义(P0.05),经治疗后各时间点博莱霉素+罗格列酮组较博莱霉素组表达量上升,差异有统计学意义(P0.05)。3 Western blot结果:各时间点博莱霉素组P-AKT表达较对照组升高,差异有统计学意义(P0.05);罗格列酮作用后博莱霉素+罗格列酮组P-AKT表达7天、14天、28天均较博莱霉素组表达下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1罗格列酮对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化有治疗作用。2肺纤维化过程中,PAI-1表达升高,u PA表达降低,纤溶系统受到抑制。PPARγ活化后,可以降低PAI-1表达,升高u PA表达,活化纤溶系统。3罗格列酮对肺纤维化的治疗作用可能是通过纤溶系统活化后,抑制P-AKT信号通路实现的。
【关键词】：肺纤维化 罗格列酮(RSG) 纤溶系统 纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1) P-AKT信号通路
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R563
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩写10-11
• 前言11
• 材料与方法11-20
• 结果20-22
• 附图22-27
• 附表27-28
• 讨论28-32
• 结论32
• 参考文献32-35
• 综述PAI-1 的结构和功能35-44
• 参考文献38-44
• 致谢44-45
• 个人简历45

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本文编号：263136