基于p38MAPK通路研究益气活血法对糖尿病大鼠血管病变的作用机制
发布时间：2017-03-23 18:26
本文关键词：基于p38MAPK通路研究益气活血法对糖尿病大鼠血管病变的作用机制，，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的观察丹蛭降糖胶囊对糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)模型大鼠氧化抗氧化系统及血管组织的影响,着重基于p38丝裂原活化的蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinas,p38MAPK)信号传导通路了解丹蛭降糖胶囊对DM血管病变的影响并阐述其机制。方法将104只大鼠适应性喂养1周后随机分成2大组:正常组12只、高脂组92只,各组间体重无显著性差异,明暗周期12/12h,自由觅食。实验过程中,正常组饲料为普通大鼠饲料,高脂组饲料为专用高脂高糖饲料(其中含10%的猪油、20%的蔗糖、1%的胆固醇、0.5%的胆酸钠)。4星期后,高脂组大鼠按30mg·kg-1体重的剂量腹腔注射链尿佐菌素(Streptozotocin,STZ),不合格者再依据25 mg·kg-1体重注射STZ。DM模型成功标志为,随机血糖(random blood sugar,RBS)16.7mmol·L-1,共有77只符合诊断标准。重新将已成DM模型的大鼠随机分为6组:模型组12只,丹蛭降糖胶囊(DZ)高组13只,DZ中组13只,DZ低组13只,吡格列酮(PT)组13只、丹蛭吡格列酮(DP)组13只。给药:模型组与正常组予生理盐水5 mL·kg-1·d-1灌胃。DT高组1.08g·kg-1·d-1,DT中组0.72g·kg-1·d-1,DT低组0.54g·kg-1·d-1(分别按成人公斤体重折算剂量的12,8,6倍给予丹蛭降糖胶囊);PT组大鼠依文献给予吡格列酮胶囊量10 mg·kg-1·d-1。DP组用丹蛭降糖胶囊1.08 g·kg-1·d-1加上吡格列酮10 mg·kg-1·d-1悬液灌胃;于每天上午八点灌药,共给药8周。期间观察及记录各组大鼠一般精神状况,饮水、进食、活动、毛色变化情况,每星期测量1次尾静脉血糖,称体重及记录。实验结束时,禁食12小时后,将所有实验大鼠麻醉、腹主动脉采血,并剪取腹主动脉组织留样备存,完善相应的检测。结果实验结束时共有19只大鼠死亡,各药物组大鼠一般情况较模型组改善。其中DZ高,DZ中剂量组精神萎靡、皮损等一般情况较DT组及DP组良好。降糖作用中,DZ组与DP组效果相当。(1)大鼠氧化应激系统活性:灌胃8周后,和模型组相比,各药物组DM模型大鼠血清过氧化脂质(Lipid peroxidation,LPO)、用邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶(Superoxide Dlismutase,SOD)、用改良的Hafeman法测定谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidase,gsh-px)、用过硼酸盐作底物滴定法测定过氧化氢酶(catalase,cat)、用3,3,-二氨基联苯胺显色法测定过氧化物酶(peroxidase,pod)活性均提高,其差异统计有统计学意义(p0.05)。(2)westernblot法:模型组大鼠腹主动脉丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(mitogenactivatedproteinkinasephosphatase-1,mkp-1)蛋白表达水平明显下调,磷酸化p38丝裂原活化的蛋白激酶(p-p38mitogenactivatedproteinkinase,p-p38mapk)、丝裂原活化的蛋白激酶3/6(mitogenactivatedproteinkinasekinasse3/6,mkk3/6)、核转录因子camp反应元件结合蛋白1(campresponseelement-bingdingprotein1,creb1)、环氧化酶2(cyclooxygenase2,cox2)、细胞间粘附分子-1(intercellularcelladhesionmolecule1,icam-1)蛋白表达水平明显上调,和正常组比较,其差异有统计学意义(p0.01)。经药物治疗后,各药物组p-p38mapk、mkk3/6、creb1、cox2、icam-1蛋白表达水平下调,mkp-1蛋白表达水平上调,与模型组大鼠相比,其差异统计有统计学意义(p0.05)。(3)免疫组化法:与正常组大鼠相比,大鼠腹主动脉p-p38mapk表达在模型组中表达显著增强,和模型组大鼠相比,大鼠p38mapk的表达在药物组中显著下降,表达量由低到高按次序为pt组,dz高组,dp组,dz中组,dz低组。(4)rt-pcr检测示:药物治疗后,各药物组大鼠趋化蛋白因子-1(monocytechemoattractantprotein-1,mcp-1)mrna、抵抗素mrna的表达下降,与模型组大鼠比较,其差异有统计学意义(p0.01),其中,dz高、dz中组、pt组间大鼠mcp-1、抵抗素mrna表达水平未见明显变化,无统计学意义。与模型组大鼠相比,氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisomeproliferatoractivatedreceptor-γ,ppar-γ)统计,其差异无统计学意义;(5)透射电镜图像:模型组大鼠腹主动脉细胞内膜增厚情况显著,管腔变窄,泡沫细胞显量形成,提示dm模型血管病变较为成功。灌胃给药8星期后,各药物组图像显示内膜增厚,内弹性膜出现断裂,线粒体肿胀,粗面内质网扩张等情况,与模型组比较得到一定改善,提示两种药物都能减轻dm大鼠腹主动脉血管细胞受损,其中dz高组改善最为明显。(6)苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,he)染色可见:正常组:血管内膜结构清晰,表面光滑,内皮细胞形态规则,无脱落;模型组:内膜明显增厚,表面粗糙,内皮细胞形态不规则,泡沫细胞堆积,中膜增厚,平滑肌细胞排列杂乱;与模型组相比,药物组组织形态变化都有不同程度的减轻。结论益气活血方丹蛭降糖胶囊能明显改善DM模型大鼠精神状态,减轻皮损、多饮等症状,提示丹蛭降糖胶囊在防治、延缓DM大鼠血管病变方面相对吡格列酮有优势。丹蛭降糖胶囊可抑制DM模型大鼠制氧化应激损伤,调节或纠正氧化与抗氧化系统失衡状态;模型组DM大鼠p38MAPK通路中相关蛋白的表达活性改变,提示p38 MAPK通路在DM血管病变形成过程中有密切关系;药物丹蛭降糖胶囊灌胃后,DM模型大鼠p38MAPK通路相关蛋白的表达可得到较好的纠正恢复;同时,益气活血法方药丹蛭降糖胶囊可改善DM模型大鼠血管组织病理形态,降低病变细胞泡l潭
本文编号：264349
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/mazuiyixuelunwen/264349.html
最近更新
教材专著
