瑞舒伐他汀对UUO大鼠模型LPA1受体、RhoA、CTGF及Ⅲ型胶原表达的影响

发布时间：2017-03-25 11:02

  本文关键词：瑞舒伐他汀对UUO大鼠模型LPA1受体、RhoA、CTGF及Ⅲ型胶原表达的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:肾间质纤维化是慢性肾脏病(Chronic Kidney Disease,CKD)的最终表现,使慢性肾脏病不可避免的进展至终末期肾病(End Stage Renal Disease,ESRD),其治疗包括血液净化和肾移植治疗。肾间质纤维化以肾小管间质纤维化和肾小球硬化为主要表现,分子学机制表现为:细胞外基质的过度沉积(Extracellular Matrix,ECM),而病理学则往往表现为细胞的激活,例如:上皮细胞间充质转分化、纤维母细胞、纤维细胞、肌成纤维细胞、单核/巨噬细胞的浸润等;细胞凋亡和信号分子的激活,例如:转化生长因子-β、血管紧张素-Ⅱ等。3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMG-Co A reductase)作为胆固醇合成过程中的限速酶,在胆固醇合成过程中起关键作用,其抑制剂即他汀类药物是治疗血脂异常的经典药物。他汀类药物普遍应用于心脑血管疾病,但是它的多效性还体现在抗炎症细胞浸润、抗氧化应激、减轻细胞外基质沉积等,具有肾脏保护作用。有关研究显示:肾间质纤维化过程中溶血磷脂酸受体-1(Lysophosphatidic Acid Receptor-1,LPA1R)表达增加,从而诱导结缔组织生长因子(Connective Tissue Growth Factor,CTGF)和Ⅲ型胶原(Collagen TypeⅢ)的表达增加,此过程通过多种信号通路来调节,是否通过小G蛋白Rho A来调控研究尚少,他汀类药物可通过其异戊二烯化作用降低Rho A蛋白的表达。本实验目的是拟通过瑞舒伐他汀的干预,观察其对LPA1受体、Rho A、CTGF及Ⅲ型胶原在单侧输尿管梗阻模型所致的肾间质纤维化大鼠中表达的影响,研究LPA1受体是否是通过小G蛋白Rho A进行调控,探讨瑞舒伐他汀减轻、延缓肾间质纤维化,肾脏保护作用的可能机制,为延缓慢性肾脏病的进展提供新的治疗靶点。方法:将54只SPF级雄性SD大鼠(体重180g±20g)编号后按照随机原则分为三组:正常对照组(A组)18只,模型组(单侧输尿管结扎组,B组)18只,治疗组(瑞舒伐他汀干预组,C组)18只。适应性喂养7天后建立单侧输尿管梗阻模型,各组大鼠于术前12小时开始禁食水。手术过程如下:每组大鼠均以10%水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔注射+2%盐酸利多卡因皮下浸润麻醉。备皮消毒铺单后,触诊肾脏,给予左侧腹部纵形切口,逐层分离组织层及肌肉层,暴露左肾,并沿左肾下极找到左输尿管,在输尿管中上1/3处用4—0号线上下结扎并从中剪断输尿管,以防逆行性感染,逐层缝合至皮肤。A组大鼠除不结扎和剪断输尿管外,其他手术过程与其余两组相同。C组给予瑞舒伐他汀混悬液10mg/(Kg·d)灌胃;对照组及模型组每日给予等容积的0.9%氯化钠注射液灌胃;三组大鼠均于造模前1天开始灌胃。单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral occlusion,UUO)术后分别于3、7、14天取6只大鼠处死,留取左肾标本置于4%多聚甲醛固定液中固定并编号,经梯度酒精逐级脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,制成3um切片,烘干,然后用HE、Masson染色法染色后,于光镜下观察大鼠肾脏组织病理改变及肾间质纤维化程度;应用免疫组化技术检测LPA1受体、Rho A、CTGF及Ⅲ型胶原在肾脏中的表达,对结果进行半定量分析。所有实验数据用SPSS 20.0统计分析软件进行统计学处理,以均数±标准差(x±S)表示统计结果,应用单因素方差分析对数据进行分析,P0.05表示结果有统计学意义。结果:1肾组织病理形态学观察光镜下HE染色:A组,肾小球和肾小管及间质未见明显异常;B组,术后第3天,可观察到少量炎症细胞在肾间质局部浸润,肾小管有轻度扩张;第7天,可观察到大量炎症细胞浸润于肾间质区域,肾间质宽度明显增加,肾小管明显扩张,上皮细胞变性、坏死;第14天,可见较多肾小管萎缩,肾小管基底膜有弥漫性增厚、皱缩;C组,术后肾小管间质病变随梗阻时间延长进行性加重,和同时相B组相比,病变程度有所减轻,但仍明显重于A组。光镜下Masson染色:A组,未见明显异常;B组,术后第3天可观察到肾小管轻度扩张,肾间质区域可见少量蓝色胶原纤维沉积,与A组相比有所增加;术后第7天及第14天,肾小管扩张程度进行性加重,胶原纤维沉积显著增多,间质纤维化现象明显;C组,术后肾小管扩张程度、胶原纤维表达水平随梗阻时间延长进行性加重、增多,虽较同时相B组的病变程度稍轻,但仍明显重于A组。2肾组织中LPA1受体、Rho A、CTGF及Col-Ⅲ免疫组织化学染色LPA1受体:A组,肾小管上皮细胞、系膜细胞微量表达;B组,肾小管上皮细胞及肾间质大量表达,且随梗阻时间的延长表达量增加,较同时相A组有统计学差异(P均0.05);C组,肾小管上皮细胞及肾间质大量表达,随梗阻时间的延长进行性加重,较同时相A组表达增加,有统计学差异(P均0.05),但B、C两组间表达无统计学差异(P均0.05)。Rho A:A组,肾小管上皮细胞轻微表达,为基础水平的表达,肾小球无明显表达;B组,随着梗阻时间的延长,肾小管上皮细胞及肾间质表达增加,有统计学差异(P均0.05),较A组同时相表达增加,有统计学差异(P均0.05);C组,随着梗阻时间延长表达增加,术后3、7、14天相比有统计学差异(P均0.05),与同时相B组相比术后3天和术后7天无统计学差异(P0.05),较术后14天有统计学差异(P0.05),较同时相A组有统计学差异(P均0.05)。CTGF:A组,肾小球无明显表达,在肾小管上皮细胞轻微表达;B组,术后3、7、14天较A组同时相表达均增加(P均0.05),术后7天较术后3天表达增加有统计学差异(P0.05),术后14天表达进一步增加(P0.05);C组,随梗阻时间的延长,其表达增加有统计学差异(P均0.05),与同时相B组相比表达下降,与A组相比表达增加(P均0.05)。Col-Ⅲ:A组,肾小管上皮细胞轻微表达,为基础水平的表达,肾小球无明显表达;B组,随着梗阻时间的延长,肾小管上皮细胞及肾间质表达增加,但术后3天及术后7天表达无统计学差异(P0.05),较术后14天分别具有统计学差异(P均0.05),较A组同时相表达增加,有统计学差异(P均0.05);C组,随着梗阻时间延长表达增加,但术后3天和术后7天无统计学差异(P0.05),分别较术后14天有统计学差异(P均0.05),较同时相A组和B组均有统计学差异(P均0.05)。结论:LPA1受体、Rho A、CTGF和Col-Ⅲ在梗阻侧肾脏表达增加,且具有时间依赖性。瑞舒伐他汀通过下调Rho A的表达,减轻CTGF和Ⅲ型胶原在肾脏的表达,从而可能起到延缓及减轻肾间质纤维化的作用。瑞舒伐他汀减轻肾间质纤维化的作用机制之一可能是通过下调Rho A,抑制其异戊二烯化作用保护肾脏功能。
【关键词】：瑞舒伐他汀 肾间质纤维化 RhoA 溶血磷脂酸受体-1 结缔组织生长因子 Ⅲ型胶原
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965
【目录】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-13
• 英文缩写13-14
• 前言14-15
• 材料与方法15-19
• 结果19-22
• 附图22-46
• 附表46-49
• 讨论49-54
• 结论54
• 参考文献54-59
• 综述 HMG-CoA还原酶抑制剂抗肾间质纤维化的作用机制59-66
• 参考文献63-66
• 致谢66-67
• 个人简历67

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 王洪涛;周建华;;小G蛋白Rho与肾间质纤维化[J];国际内科学杂志;2009年07期

2 卢思广;刘健胜;于艳辉;;肾小管间质纤维化发病机制的研究进展[J];实用儿科临床杂志;2011年17期

3 李庆宪;查文菁;;他汀类药物非调脂作用的研究新进展[J];中国医院药学杂志;2009年17期

4 梁艳;王皓;杨再兴;仲人前;;上皮间质转化在纤维化疾病中的研究进展[J];中国实验诊断学;2013年08期

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本文编号：267071