益气活血中药配伍联合双抗药物抗血栓作用及出血风险研究

发布时间：2017-04-10 12:24

  本文关键词：益气活血中药配伍联合双抗药物抗血栓作用及出血风险研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：有效抑制血栓形成同时减少出血风险,是治疗心脑血管血栓性疾病的关键。益气活血法是心脑血管血栓性疾病常用治法之一。“十一五”期间我们一项多中心随机对照研究证实,在西医常规治疗基础上,联合益气活血中药可明显降低冠状动脉介入治疗术后急性冠脉综合征患者心血管病事件(猝死、非致死性心肌梗死和非致死性脑卒中)的发生,改善患者生存质量,且不会增加出血风险。那么,益气活血中药配伍联合双联抗血小板药物(阿司匹林+氯吡格雷,双抗)是否可进一步加强抗血栓作用,同时减少出血风险,其作用机理何在?目前尚缺少相关研究。1.临床研究目的；观察益气活血中药配伍联合双抗(阿司匹林+氯毗格雷)对气虚血瘀型冠心病患者的治疗作用。方法：采用历史性对照研究,治疗组纳入50例气虚血瘀型冠心病患者,在服用双抗的西药常规治疗基础上加用益气活血中药；对照组随机选取2010年--2012年安贞医院服用双抗的西药常规治疗诊断为气虚血瘀型冠心病患者50例。两组(人口学特征、心率、血压、心脑血管病史、心脑血管病家族史、吸烟史、饮酒史、基础用药等)基线资料基本一致(P0.05)。观察患者治疗前、治疗4周和治疗3个月血小板最大聚集率、心绞痛评分、气虚血瘀症候评分及血瘀证评分；治疗前、治疗3个月和治疗6个月消化道不良反应例数及积分变化。结果：(1)与治疗前比较,治疗组治疗4周、3个月患者血小板最大聚集率、心绞痛评分、气虚血瘀证候评分、血瘀证评分降低(P0.05,P0.01),治疗6个月消化道不良反应例数与消化道不良反应积分增多(P0.01)； (2)与对照组比较,治疗组患者治疗4周、 3个月血小板聚集率、心绞痛评分、气虚血瘀证候评分、血瘀证评分降低(P0.05,P0.01),治疗3个月、6个月消化道不良反应例数及消化道不良反应积分减少(P0.05,P0.01)。结论：益气活血中药配伍联合服用双抗的西药常规治疗可进一步降低血小板聚集率,改善患者心绞痛症状、气虚血瘀症候及双抗所致的消化道不良反应。2.实验研究实验一目的：观察西洋参茎叶总皂苷(Panax quinquefolius Saponin, PQS)与三七总皂苷(Panax quinquefolius Saponin, PNS)配伍联合双抗对急性心肌梗死(Acute myocardial infarction, AMI)大鼠模型的抗血栓作用,并基于环氧化酶(Cyclooxygenase, COX)/前列腺素(Prostaglandin, PG)通路研究其可能机制。方法：采用Wistar大鼠结扎左冠状动脉前降支建立AMI模型,造模成功大鼠随机分为模型组、双抗组、PQS+双抗组、PNS+双抗组及PQS+PNS+双抗组,同时设假手术组,每组各15只。灌胃14天后,麻醉并取材。HE、TTC染色并计算心梗(Myocardial infarction, MI)面积,比浊法检测血小板聚集率,流式细胞术检测CD62p阳性表达率,放免法检测血浆血栓素B2 (Thromboxane B2, TXB2, TXA2稳定代谢产物)、血浆6-酮-前列腺素F1α (6-Keto-PGF1α, PGI2稳定代谢产物)、血清组织型纤溶酶原激活物(Tissue plasminogen activator, t-PA)和血清纤溶酶原激活物抑制物1(Plasminogen activator inhibitor-1, PAI-1)水平,并计算TXB2/6-Keto-PGF1α比值。结果：(1)与假手术组比较,模型组大鼠MI面积、血小板聚集率、CD62p阳性表达率、血浆TXB2含量、TXB2/6-Keto-PGFIα比值、血清PAI-1及D-二聚体含量升高(P0.05,P0.01),血清t-PA含量降低(P0.01)； (2)与模型组比较,双抗组MI面积减小,血小板聚集率、CD62p阳性表达率、血浆TXB2含量、血浆6-Keto-PGFIα含量、血清D-二聚体含量降低(P0.05, P0.01), TXB2/6-keto-PGF1α比值、血清t-PA及PAI-1含量变化不明显(P0.05)；(3)与双抗组比较,PQS+双抗组MI面积、血小板聚集率及CD62p阳性表达率有降低趋势(P0.05),血浆6-Keto-PGFIα含量、血清t-PA含量升高(P0.05),血浆TXB2浓度、TXB2/6-keto-PGF1α比值、血清PAI-1及血清D-二聚体含量降低(P0.05)；PNS+双抗组、PQS+PNS+双抗组MI面积、血小板聚集率及CD62p活化率、血浆TXB2浓度、TXB2/6-keto-PGF1α比值、血清PAI-1含量降低(P0.05,P0.01),血浆6-Keto-PGFIα含量及血清t-PA含量升高(P0.05,P0.01); PNS+双抗组血清D-二聚体含量变化不明显,PQS+PNS+双抗组D-二聚体含量降低(P0.05)；(4)与PQS+双抗组比较,PQS+PNS+-双抗组血小板聚集率、CD62p阳性表达率、TXB2/6-keto-PGF1α比值降低(P0.05)；与PNS+双抗组比较,PQS+PNS+双抗组TXB2含量及TXB2/6-keto-PGF1α比值升高(P0.05)。结论：(1)PQS与PNS配伍联合双抗可进一步降低大鼠MI面积,并增加抗血栓作用,机制可能与PQS与PNS增强阿司匹林对血小板COX-1/TXA2的抑制,改善TXA2/PGI2平衡、激活纤溶系统有关。 (2)PQS与PNS配伍联合双抗降低大鼠MI面积方面优于PQS或PNS单独联合双抗,抗血小板作用优于PQS联合双抗。实验二目的：观察PQS与PNS配伍联合双抗对AMI大鼠模型的胃黏膜损伤的保护作用,并基于COX/PG通路研究其可能机制。方法：采用Wistar大鼠结扎左冠状动脉前降支建立AMI模型,分组方法同实验一。灌胃14天后,麻醉并取材。扫描电镜观察大鼠胃黏膜超微结构变化,放免法检测血清胃动素(Motilin, MIT)、胃泌素(Gastrin, GAS)和胃组织PGE2含量,免疫组化法检测胃组织血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor, TNF-α)含量,Western blot法检测胃组织COX-1和COX-2蛋白表达。结果：(1)与假手术组比较,模型组大鼠胃黏膜损伤不明显,血清GAS和MTL含量下降(P0.05)；胃组织COX-2和TNF-α表达升高(P0.01)(2)与假手术组比较,双抗组大鼠胃黏膜上皮、固有层不同程度损伤；血清GAS、MTL含量、胃组织PGE2、 COX-1、COX-2和VEGF表达下降(P0.05,P0.01),胃组织TNF-α表达升高(P0.01)；(3)与双抗组比较,PQS+双抗、PNS+双抗及PQS+PNS-双抗组,除PQS+双抗组胃组织变化不明显((P0.05),其余大鼠胃黏膜上皮、固有层损伤程度减轻；血清GAS、MTL含量、胃组织COX-1、COX-2、PGE2和VEGF表达升高(P0.05,P0.01),胃组织TNF-a表达降低(P0.05)；(4)与PQS+PNS+双抗组比较,PQS+双抗组胃组织COX-1表达降低(P0.05),PNS+双抗组胃组织TNF-a表达升高(P0.05)。结论：(1)双抗导致AMI模型大鼠胃黏膜损伤可能与降低血清GAS、MTL浓度和胃组织COX-1、COX-2、PGE2及VEGF表达及升高胃组织TNF-a表达相关；(2)PQS与PNS配伍能减轻双抗所致的胃黏膜损伤,其机制可能与升高血清GAS、MTL含量和胃组织COX-1、COX-2、PGE2、VEGF表达,抑制胃组织TNF-a表达有关；(3)PQS、PNS配伍双抗在上调胃组织COX-1、COX-2、PGE2、VEGF表达和抑制TNF-α表达方面优于PQS或PNS单独联合双抗。实验三目的：基于PI3K/Akt/Racl与ROCK/RhoA通路的关系研究PQS与PNS配伍联合双抗对大鼠脑缺血再灌注(Ischemia/Reperfusion, I/R)模型脑微循环的影响。方法：采用Wistar大鼠线栓法制作大鼠中动脉闭塞,2h后拔出线栓,制备大脑中动脉I/R模型,术后第一天神经功能缺损严重程度量表(mNSS)评分7-12分者纳入实验,分组灌药方法同实验一。灌胃14天后,麻醉大鼠,颅骨开窗法观察大鼠软脑膜细动、静脉血管直径、血管内红细胞及白细胞状态。取大鼠大脑,TTC染色计算脑梗面积,Western Blot法检测脑组织p-Akt/GAPDH、GTP-Rac1/Total-Rac1、GTP-RhoA/ Total-RhoA、ROCK/GAPDH及p 120-Catenin/VE-cadherin的表达。结果：(1)与假手术相比,脑膜微循环障碍,脑梗死面积、脑组织p 120-Catenin/VE-cadherin比值降低(P0.01),脑组织GTP-RhoA、ROCK及p-Akt表达升高(P0.01),脑组织GTP-Rac1表达差异不明显(P0.05)；(2)与模型组比较,双抗组软脑膜微循环障碍减轻；脑梗死面积、GTP-RhoA、ROCK表达降低(P0.05、P0.01),脑组织p120-Catenin/VE-cadherin比值有升高趋势(P0.05),P-Akt、GTP-Rac1表达差异不明显(P0.05)；(3)与双抗组比较,PQS+双抗组、PNS+双抗组、PQS+PNS+双抗组,除PQS+双抗组GTP-RhoA表达有降低趋势外(P0.05),软脑膜微循环障碍减轻,脑梗死面积、脑组织ROCK、GTP-RhoA表达降低(P0.05,P0.01),p120-Catenin /VE-cadherin比值、p-Akt、GTP-Rac1表达升高(P0.05,P0.01)。(4)与PQS+双抗组比较,PQS+PNS+双抗组脑组织p-Akt、GTP-Rac1表达升高(P0.05,P0.01),其余各指标差异无统计学意义(P0.05)结论：(1)大鼠脑I/R后脑微循环障碍,部分脑组织坏死,脑组织p120-Catenin/ VE-cadherin比值降低,RhoA、ROCK表达显著上升。(2)双抗药物可减轻大鼠脑I/R后脑微循环障碍及大脑坏死,并抑制RhoA/ROCK通路,但其下调RhoA表达与激活PI3K/Akt/Rac1通路无关。(3)PQS与PNS联合双抗进一步改善脑I/R后脑微循环障碍,抑制脑组织坏死,与增加脑组织p 120-Catenin/VE-cadherin比值有关,其机制可能与直接抑制RhoA/ROCK通路表达,并通过激活PI3K/Akt/Rac1通路进一步发挥抑制RhoA/ROCK通路表达作用有关。
【关键词】：急性心肌梗死 双抗 益气活血 西洋参茎叶总皂苷 三七总皂苷 胃黏膜损伤
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R54
【目录】：

• 摘要5-9
• ABSTRACT9-14
• 英文缩略语14-15
• 第一部分 综述部分 PQS与PNS治疗心脑血管血栓性疾病的研究进展15-23
• 1. PQS与PNS治疗心脑血管血栓性疾病的相同机制15-17
• 2. PQS与PNS治疗心脑血管血栓性疾病的不同机制17
• 3. 讨论与展望17-19
• 参考文献19-23
• 第二部分 经验总结 史大卓教授应用益气活血法治疗冠心病经验总结23-26
• 1. 关于冠心病病因病机的认识23
• 2. 关于冠心病的中医治法23-25
• 参考文献25-26
• 第三部分 临床研究 益气活血中药配伍联合双抗治疗气虚血瘀型冠心病的临床研究26-36
• 1. 资料26-28
• 2. 方法28-30
• 3. 结果30-35
• 4. 小结35
• 5. 讨论35-36
• 第四部分 实验研究36-83
• 前言36-40
• 实验一 PQS和PNS配伍联合双抗对急性心肌梗死大鼠血小板活化和血栓形成的影响40-55
• 1. 材料40-41
• 2. 方法41-44
• 3. 结果44-52
• 4. 小结52
• 5 讨论52-55
• 实验二 PQS和PNS配伍对双抗致急性心肌梗死模型大鼠胃黏膜损伤的影响55-70
• 1. 材料55-57
• 2. 方法57-61
• 3. 结果61-67
• 4. 小结67
• 5. 讨论67-70
• 实验三 PQS和PNS配伍联合双抗对脑缺血再灌注模型大鼠脑微循环的影响70-83
• 1. 材料70-71
• 2. 方法71-74
• 3. 结果74-80
• 4. 小结80
• 5. 讨论80-83
• 结语83-84
• 参考文献84-92
• 附录92-98
• 致谢98-99
• 在学期间主要研究成果99-100
• 个人简历100

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