灯盏花素对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌脂肪酸代谢的影响及作用机制

发布时间：2017-04-24 07:15

  本文关键词：灯盏花素对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌脂肪酸代谢的影响及作用机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:前期研究发现,灯盏花素对2型糖尿病及高脂血症有明显改善作用。本实验通过高脂高糖喂养,诱导胰岛素抵抗(IR)大鼠模型。通过口服糖耐量试验,观察空腹血糖(FBG)、空腹血清胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(IRI),评价模型建立;灯盏花素作用2周后,检测血清及骨骼肌中游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)含量,观察并判定骨骼肌组织脂质沉积情况;测定骨骼肌中长链脂酰辅酶A(Lcco As)水平,及脂肪酸转位酶(FAT/CD36)、肉碱脂酰转移酶(CPT-1)蛋白水平及m RNA表达差异,探讨灯盏花素对IR、骨骼肌脂质沉积及脂肪酸代谢的改善情况及作用机制。方法:健康雄性SD大鼠55只,适应性喂养一周,禁食12h测FBG,选正常大鼠50只。随机分为正常组(10只)、高脂高糖组(40只),分别喂养普通饲料和高脂高糖饲料;12周后,行大鼠口服糖耐量实验(50%葡萄糖,2g/kg,灌胃)。筛选成模大鼠30只,随机分为模型组、灯盏花素高剂量组(200mg/kg,ip)、灯盏花素低剂量组(100mg/kg,ip),每组10只,分别给药2周,正常组、模型组以同样方式,给予相同剂量0.9%Na Cl注射液。14周末,各组大鼠禁食12 h,尾部采血测FBG,10%水合氯醛麻醉,腹主动脉取血,分离股四头肌组织;离心分离血清,检测血清中FINS水平,并评价胰岛素抵抗指数;试剂盒测定血清及组织中FFA、TG变化;冰冻切片油红O染色,观察骨骼肌组织脂质沉积情况;酶联免疫吸附试验检测血清Lcco As浓度的变化;western blot观察FAT/CD36、CPT-1在股四头肌的蛋白表达水平;常规PCR测定FAT/CD36、CPT-1的m RNA含量。结果:(1)大鼠FBG、FINS、IRI变化:14周后,大鼠FBG、FINS、IRI,模型组均明显高于正常组(P0.01);灯盏花素高、低剂量组各水平均低于模型组(P0.01);与低剂量组相比,高剂量组效果更显著(P0.01),有明显剂量依赖性。说明高脂高糖饮食,使大鼠出现高血糖、高胰岛素血症,明显出现IR,灯盏花素可明显降低FBG、FINS,改善IR。(2)油红O染色结果:模型组大鼠出现大量的脂滴,脂肪沉积明显(P0.01)。灯盏花素高、低剂量组较模型组有不同程度改善(P0.05),高剂量组改善效果更明显(P0.01)。提示高脂高糖饮食使大鼠骨骼肌脂肪增多,出现明显脂质沉积,灯盏花素干预后症状明显改善。(3)组织、血清内FFA、TG结果:模型组血清、骨骼肌内FFA、TG明显升高(P0.01);与模型组相比,灯盏花素高、低剂量组FFA均有明显降低(P0.01);与低剂量组相比,高剂量组TG明显降低(P0.01)。14周喂养,大鼠出现高甘油三酯、高脂肪酸血症,灯盏花素可显著降低高脂血症。(4)骨骼肌Lcco As结果:与正常组比较,模型组大鼠Lcco As水平明显增加(P0.01);用药后,与模型组比较,灯盏花素高、低剂量组大鼠Lcco As水平降低(P0.01),高剂量组改善更为明显(P0.01)。Lcco As为长链脂肪酸在细胞内的活性形式,IR大鼠Lcco As含量升高,说明细胞内摄入的长链脂肪酸增多,灯盏花素可以改善此酶的活性,抑制其摄入。(5)FAT/CD36蛋白及m RNA结果:FAT/CD36在股四头肌的表达,模型组比正常组表达增多(P0.01);与模型组比较,灯盏花素高、低剂量组表达不同程度改变(P0.01),其中高剂量组表达改变最明显(P0.01),且有剂量依赖性。FAT/CD36介导脂肪酸进入细胞,IR大鼠FAT/CD36含量增加,说明脂肪酸摄入增多,而灯盏花素能抑制其摄入增多。(6)CPT-1蛋白及m RNA结果:与正常组相比,模型组CPT-1蛋白及m RNA表达明显减少(P0.01);灯盏花素高、低剂量组相较于模型组,CPT-1蛋白及m RNA均增加(P0.01)。CPT-1是线粒体氧化脂肪酸的关键限速酶,IR大鼠CPT-1蛋白及m RNA明显减少,脂肪酸氧化减少,而灯盏花素治疗使其表达增加,脂肪酸氧化增多,改善糖脂代谢紊乱。结论:(1)高脂高糖饮食可以成功复制胰岛素抵抗大鼠模型。(2)胰岛素抵抗大鼠,血清及骨骼肌中FFA、TG明显升高,股四头肌出现明显脂质沉积。(3)胰岛素抵抗大鼠模型,骨骼肌中与脂肪酸摄入相关的FAT/CD36及Lcco As含量增加,而氧化必须的CPT-1表达减少。(4)灯盏花素可降低FBG、FINS,改善IR;减少FFA、TG含量,改善骨骼肌脂质堆积情况;其机制可能与降低Lcco As、FAT/CD36,增加CPT-1的表达相关。
【关键词】：灯盏花素 胰岛素抵抗 FAT/CD36 LccoAs CPT-1
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 常用缩写词中英文对照表12-13
• 前言13-15
• 1 材料与方法15-27
• 1.1 实验动物15
• 1.2 主要试剂和仪器15-16
• 1.3 模型制备与标本采集16-17
• 1.4 指标检测17-26
• 1.5 结果处理26-27
• 2 结果27-31
• 2.1 模型评价结果27
• 2.2 FBG、FINS及IRI水平比较27-28
• 2.3 油红O染色结果28
• 2.4 大鼠血清、组织FFA、TG含量28-29
• 2.5 股四头肌组织Lcco As含量29
• 2.6 western blot检测FAT/CD36、CPT-1 的水平29-30
• 2.7 常规PCR测定FAT/CD36、CPT-1 的mRNA含量变化30-31
• 3 讨论31-33
• 4 结论33-34
• 参考文献34-37
• 附图37-45
• 综述45-55
• 参考文献50-55
• 附录55-57
• 致谢57-58
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果58-59
• 个人简历59

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本文编号：323798