肉毒毒素A对神经源性疼痛大鼠行为学及脊髓前角运动神经元CGRP的影响

发布时间：2017-04-26 15:09

  本文关键词：肉毒毒素A对神经源性疼痛大鼠行为学及脊髓前角运动神经元CGRP的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：制备L5、L6脊神经结扎神经病理性疼痛大鼠模型,观察肉毒毒素A(BoNT-A)对引起慢性神经源性疼痛模型大鼠行为学的影响,并检测脊髓前角运动神经元降钙素基因相关肽(CGRP)的表达情况。方法：(1)建立Wistar大鼠左侧L5、L6脊神经结扎模型(SNL模型)。随机将SNL模型大鼠分为2组(n=8),为实验对照平衡,假实验组大鼠同样为8只。实验组：在SNL术后第3天,于神经损伤同侧足底皮下注射BoNT-A(30U/kg);对照组：模型制备后相同时间,在损伤同侧足底皮下注射容积相同的生理盐水；对于假手术组：只暴露同侧L5和L6脊神经但不进行结扎。SNL模型制备完成后,所有三组大鼠均分别测定术前3d、给药后1d、3d、5d、7d、14d、21d的两个指标：机械缩足反射阈值(MWT,单位为g)和热缩足反射潜伏期(TWL,单位为s)。(2)于损伤后第1w、2w、3w及第4w时,实验组、对照组、假手术组分别随机取4只大鼠。大鼠充分麻醉后,经升主动脉先后灌注生理盐水(4℃,120ml)、多聚甲醛(pH 7.4,4%,200ml)。经后路逐层暴露脊柱L4-6脊髓节段并切取L4-6节段。随后经多聚甲醛固定、25%蔗糖脱水、冰冻及横断切片,经适当处理后以备观察。利用免疫组织化学技术结合图像分析技术检测各组脊髓前角运动神经元内CGRP的表达变化。结果：实验过程中无动物意外死亡。切口均I期愈合,未发生伤口感染。与手术前相比,对于对侧肢体MWT和TWL的变化,假手术组大鼠两个指标均未见明显变化；手术后实验组大鼠对侧肢体MWT的给药前值为(8.6±4.7)g,术后1天MWT降至.(5.0±1.9)g,随后在较低的水平至维持21天(4.0±1.3)g(P0.01);对于TWL具有同样的表现,给药前值、给药后第1天、第21天分别为(23.9±1.1)s、(14.1±0.3)s、(14.1±0.7)s。对于同侧肢体MWT和TWL的变化,对照组大鼠手术同侧肢体MWT和TWL均未见明显变化。对于实验组大鼠,给药前MWT及TWL值分别为(4.2±1.5)g、(13.9±0.3)s,在给药后MWT和TWL均明显增加(P0.01),并且在给药后的第5天达到高峰,分别为(13.8±4.8)g、(22.1±2.0)s,给药后21天恢复到给药前水平。第2周及第4周取材免疫组织化学染色显示,CGRP的阳性表达主要位于脊髓前角运动神经元的胞浆和树突中,着色呈浅黄色。对照组中阳性细胞数高于假手术组,着色较深,而实验组阳性细胞数明显少于对照组,着色浅。造模术后1w、2w、3w和4w,与手术前相比,假手术组脊髓前角运动神经元内CGRP的表达未见明显变化。对照组脊髓前角运动神经元内CGRP的阳性表达由手术前的154.7±2.9逐渐升高,术后第2周达到178.2±3.6,术后第4周略下降至162.1±2.9。手术组手术前脊髓前角运动神经元内CGRP的阳性表达为152.3±3.0,给药后阳性表达数目逐渐下降,术后第2周阳性表达计数为120.4±3.1,该降低效应维持一段时间后,在第4周略升高至131.6±3.4。结论：足底皮下注射BoNT-A能够改善SNL模型大鼠手术同侧肢体的MWT和TWL,有镇痛作用。足底皮下注射BoNT-A抑制大鼠L5、L6脊神经损伤后脊髓前角运动神经元内CGRP的表达,可能是其镇痛作用的机制所在。
【关键词】：肉毒毒素A 神经源性疼痛 SNL模型 降钙素基因相关肽 运动神经元
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R741
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 中英文缩写对照7-9
• 第一部分 肉毒毒素A对神经病理性疼痛大鼠行为学的影响9-19
• 引言9-10
• 实验材料与方法10-13
• 1.1 实验材料10-11
• 1.2 实验方法11-13
• 结果13-17
• 讨论17-19
• 第二部分 肉毒毒素A对神经病理性疼痛大鼠CGRP的影响19-29
• 引言19-20
• 实验材料与方法20-23
• 1.1 实验材料20
• 1.2 实验方法20-22
• 1.3 统计学分析22-23
• 结果23-27
• 讨论27-29
• 参考文献29-31
• 结论31-32
• 文献综述32-48
• 参考文献44-48
• 读研期间主要学术成果48-49
• 致谢49

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 曹莹莹;司军强;李丽;成洪聚;闫观茹;王磊;;降钙素基因相关肽与中枢系统神经病理性疼痛[J];包头医学院学报;2008年05期

2 吴仲敏;凌树才;朱f^;吴松江;;成人和大鼠阴茎包皮及包皮系带内降钙素基因相关肽免疫阳性神经末梢的分布及来源[J];解剖学报;2006年04期

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本文编号：328676