黑素瘤动态发展过程多影像模态多参数研究

发布时间：2021-08-17 23:58

　　黑素瘤是一种主要发生在皮肤的高度恶性肿瘤,其病程进展快、侵袭能力强、对放化疗不敏感,且预后极差。因此,早期诊断和治疗是降低死亡率的关键。那么,建立合适的动物模型来研究肿瘤的发生发展,对临床发现和治疗皮肤黑素瘤具有重大意义。而以往的研究基本上仅针对某一技术开展,如影像学或者参数测量实验,只能在该技术下对肿瘤表现或改变进行分析,无法对肿瘤同时进行多角度分析,结果较为局限,而多元化的分析对于肿瘤发生发展的研究是至关重要的。基于此,本文首先建立了稳定的裸鼠皮肤黑素瘤模型;然后利用影像学设备、介电特性测量系统等对肿瘤发生发展进行非侵入性研究。动物模型建立的研究中,通过对裸鼠经皮下注射A375细胞悬液建立皮肤黑素瘤模型,并对结果进行病理验证。结果显示,该方法成功构建裸鼠皮肤黑素瘤模型,造模成功率为87.5%。显微镜下肿瘤细胞大小、形态不一,呈多向分化,胞浆内可见黑色素颗粒。影像学监测研究中,利用小动物高频超声、光学相干断层成像（Optical Coherence Tomography,OCT）技术对皮肤黑素瘤的发生发展过程进行非侵入性连续监测,并对过程中的影像图特征进行定性和定量分析。结果显示,O... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１?ＯＣＴ原理图

?第二章裸鼠黑素瘤模型的建立???ｌｌｉｉ?Ｊ?｜ｊｇ｜?ｊ??图２－１?Ａ３７５细胞。其中Ａ融合度为５０？６０％，Ｂ融合度为８０？９０°／〇。??Ｆｉｇ．?２－１?Ａ３７５?ｃｅｌｌｓ．?Ａ?ｆｕｓｉｏｎ?ｄｅｇｒｅｅ?ｉｓ?５０－６０％，?Ｂ?ｆｕｓｉｏｎ?ｄｅｇｒｅｅ?ｉｓ?８０－９０％．??（三）Ａ３７５细胞的冻存??（１）传代２４？４８ｈ的对数生长期细胞；??（２）收集细胞，按照细胞传代培养的操作方法进行操作，离心条件选择??ｌＯＯＯｒｐｍ，离心?３ｍｉｎ；??（３）离心期间配置冻存液：ＦＢＳ和ＤＭＳＯ按照９：１的比例配置（该过程??需避光操作）；??（４）弃上清，加入适量冻存液，取少量细胞悬浮液用于计数，使细胞保??存终浓度为１Ｘ１?〇６？３Ｘ１?〇６，混合均匀；??（５）将混匀的细胞悬浮液分装于已标记好的冻存管中，每管１．５ｍＬ，并??取少量剩余的细胞悬浮液行污染检测；??（６）将冻存管放入程序降温盒，然后转移到－８０°Ｃ冰箱存放１０￣１２ｈ后，??转移到液氮罐中进行长期保存。??２．３．２动物分组及荷瘤模型制备??Ａ３７５细胞培养至足够数量时进行肿瘤细胞接种，选择对数生长期细胞，使??用全自动细胞计数仪对细胞进行计数，调整细胞最终浓度至ｌｘｌ０７／ｍＬ。将２０只??裸鼠按照随机分配的原则，分为实验组（１６只）和对照组（４只）。实验组取０．２ｍＬ??肿瘤细胞悬液经皮下注射于裸鼠背部，并对注射部位进行标记（图２－２．Ａ）；对照??１４??

?颂士学位论文???组取０．２ｍＬ完全培养液，经皮下注射于裸鼠背部并标记（图２－２．Ｂ）。??Ｅｍ??图２－２实验组与对照组裸鼠接种后标记图。其中Ａ为实验组裸鼠接种后标记图，Ｂ为对??照组裸鼠接种后标记图。??Ｆｉｇ．?２－２?Ｌａｂｅｌｉｎｇ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｎｕｄｅ?ｍｉｃｅ?ｏｆ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ?ａｆｔｅｒ??ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ．?Ａ?ｉｓ?ｔｈｅ?ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ?ｎｕｄｅ?ｍｉｃｅ?ｉｎ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｇｒｏｕｐ，?Ｂ?ｉｓ?ｔｈｅ?ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ?ｎｕｄｅ?ｍｉｃｅ?ｉｎ??ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ??２．３．３大体观察??裸鼠自皮下注射肿瘤细胞起，每日进行常规检查，主要包括动物的精神状态、??皮肤肤色、体重等。发现成瘤后，观察并记录接种部位皮肤表面情况，如有无溃??烂、流脓、质感、结节大小等。??２．３．４组织病理检查??为验证肿瘤模型建立是否成功，以便进一步检查皮肤黑素瘤的病理学特点，??接种肿瘤细胞后第２４天，对实验组与对照组按照以下步骤进行病理分析。??（一）试剂配制??（１）?１０％中性甲醛固定液：取１０ｍＬ的甲醛放入１００ｍＬ烧杯内，加入９０??ｍＬＰＢＳ缓冲液；??（２）无水乙醇－二甲苯混合溶液：无水乙醇与二甲苯按照１：１比例配置；??（３）二甲苯－石蜡混合液：二甲苯和石蜡按照１：１比例配置；??（４）盐酸－乙醇分色液：取１?ｍＬ浓盐酸，然后加入９９?ｍＬ的７０％乙醇??溶液，需现配现用；??１５??


本文编号：3348768