噻拉嗪对大鼠脑神经系统CaMK/CREB/BDNF信号通路影响的研究
发布时间：2021-11-01 05:40
噻拉嗪作为多种复合麻醉剂的重要组成成分之一,研究其麻醉的作用机理对研究高效、副作用低的复合麻醉剂十分重要,目前,对噻拉嗪麻醉作用的神经信号通路的研究较少。本实验从分子水平对噻拉嗪的麻醉机制进行探讨,为今后的临床麻醉提供合理的分子理论依据。实验以成年Wister大鼠和PC12神经细胞为研究对象,体内实验腹腔注射70 mg/kg噻拉嗪,通过连续观察大鼠行为学变化确定实验分组,进一步检测大鼠不同脑区在不同麻醉时期的指标变化,采用RT-PCR方法检测NR1、NR2A、NR2B、CaMKII、CaMKIV、CREB、BDNF、c-jun、c-fos和fos-b的mRNA表达,Western Blot方法检测NR1、NR2A、NR2B、CaMKII、p-CaMKII、CaMKIV、p-CaMKIV、CREB、p-CREB和BDNF的蛋白表达;体外细胞实验通过在培育的PC12神经细胞中加入噻拉嗪,并且通过siRNA技术对CaMKII和CaMKIV进行靶向沉默,探究CaMKII和CaMKIV对下游CREB/BDNF通路以及IEGs（c-jun、c-fos和fos-b）的影响,采用RT-PCR方法检测C...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CaMK/CREB/BDNF信号通路图
呈现先降低后升高的趋势，而对 NR1、CaMKII 和 CaMKIV mRNA 表达无显著影响。NR1 的 mRNA 表达量在各个时期与 C 组 NR1 表达量比较无明显变化，差异不显著（P>0.05）；NR2A在 X2和X3时期的mRNA表达量较 C组下降明显，分别降低了14%（P<0.05）和 16%（P<0.05），最低值出现在 X3 时期；NR2B 在 X2、X3 和 X4 时期的 mRNA 表达量较C 组下降明显，分别降低了 24%（P<0.05）、20%（P<0.05）和 13%（P<0.05），在 X2 时期的NR2B 的 mRNA 表达量最低，随后逐步升高，至 X6 时期已恢复至 C 组 NR2B 的 mRNA 表达水平；CaMKII 和 CaMKIV 的 mRNA 表达情况同 NR1mRNA 在各个时期的表达情况类似，较C 组 NR1 mRNA 表达量比较无明显变化，差异不显著（P<0.05）。表 3-3 NR1、NR2A、NR2B、CaMKII 和 CaMKIV mRNA 表达量的变化Tab. 3-3 Change of NR1, NR2A, NR2B, CaMKII and CaMKIV mRNA expressionC X1 X2 X3 X4 X5 X6NR1 1 0.99±0.07 0.92±0.08 0.98±0.08 0.97±0.07 0.95±0.07 0.94±0.06NR2A 1 1.01±0.06 0.86±0.05* 0.84±0.04* 0.98±0.07 0.97±0.05 0.99±0.05NR2B 1 0.99±0.08 0.76±0.04* 0.80±0.07* 0.87±0.08* 0.96±0.06 0.98±0.08CaMKII 1 0.98±0.07 0.99±0.06 1.00±0.06 0.97±0.07 1.02±0.05 0.99±0.07CaMKIV 1 0.96±0.05 0.98±0.06 0.98±0.07 0.96±0.07 0.97±0.06 0.99±0.06注：数据用平均值±标准误，*表示与对照组差异显著（P<0.05），下表同。
CREB mRNA 表达量无显著影响。CREB mRNA 表达量在 X1 至 X6 时期较 C 组比较均无显著变化（P>0.05）；BDNF mRNA表达量在 X3 和 X4 时期较 C 组下降明显，分别降低了 7%和 8%（P<0.05），其他时期无显著变化；c-jun 的 mRNA 表达量的最低值出现在 X4 时期，X3、X4、X5 和 X6 时期的 mRNA 表达量较 C 组均显著降低，分别降低了 12%、14%、9%和 8%（P<0.05）；c-fos 的 mRNA 表达量 X3、X4 和 X5 时期下降明显，分别较 C 组水平下降了 8%、9%和 8%（P<0.05）；fos-b mRNA表达量在 X3、X4、X5 和 X6 时期下降明显，与 C 组 fos-b mRNA 表达量比较，分别下降了12%、11%、14%和 15%（P<0.05），差异显著。表 3-4 CREB、BDNF、c-jun、c-fos 和 fos-b mRNA 表达量的变化Tab. 3-4 Change of CREB, BDNF, c-jun, c-fos and fos-b mRNA expressionC X1 X2 X3 X4 X5 X6CREB 1 0.97±0.05 0.96±0.05 0.95±0.05 0.98±0.04 0.95±0.05 0.96±0.05BDNF 1 1.02±0.06 1.04±0.05 0.93±0.06* 0.92±0.05* 1.00±0.05 1.02±0.06c-jun 1 0.95±0.07 0.96±0.06 0.88±0.06* 0.86±0.06* 0.91±0.06* 0.92±0.06*c-fos 1 1.01±0.05 0.99±0.04 0.92±0.04* 0.95±0.05* 0.92±0.05* 0.98±0.05fos-b 1 0.97±0.08 0.94±0.06 0.88±0.07* 0.89±0.06* 0.86±0.07* 0.85±0.07*
本文编号：3469606
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CaMK/CREB/BDNF信号通路图
呈现先降低后升高的趋势，而对 NR1、CaMKII 和 CaMKIV mRNA 表达无显著影响。NR1 的 mRNA 表达量在各个时期与 C 组 NR1 表达量比较无明显变化，差异不显著（P>0.05）；NR2A在 X2和X3时期的mRNA表达量较 C组下降明显，分别降低了14%（P<0.05）和 16%（P<0.05），最低值出现在 X3 时期；NR2B 在 X2、X3 和 X4 时期的 mRNA 表达量较C 组下降明显，分别降低了 24%（P<0.05）、20%（P<0.05）和 13%（P<0.05），在 X2 时期的NR2B 的 mRNA 表达量最低，随后逐步升高，至 X6 时期已恢复至 C 组 NR2B 的 mRNA 表达水平；CaMKII 和 CaMKIV 的 mRNA 表达情况同 NR1mRNA 在各个时期的表达情况类似，较C 组 NR1 mRNA 表达量比较无明显变化，差异不显著（P<0.05）。表 3-3 NR1、NR2A、NR2B、CaMKII 和 CaMKIV mRNA 表达量的变化Tab. 3-3 Change of NR1, NR2A, NR2B, CaMKII and CaMKIV mRNA expressionC X1 X2 X3 X4 X5 X6NR1 1 0.99±0.07 0.92±0.08 0.98±0.08 0.97±0.07 0.95±0.07 0.94±0.06NR2A 1 1.01±0.06 0.86±0.05* 0.84±0.04* 0.98±0.07 0.97±0.05 0.99±0.05NR2B 1 0.99±0.08 0.76±0.04* 0.80±0.07* 0.87±0.08* 0.96±0.06 0.98±0.08CaMKII 1 0.98±0.07 0.99±0.06 1.00±0.06 0.97±0.07 1.02±0.05 0.99±0.07CaMKIV 1 0.96±0.05 0.98±0.06 0.98±0.07 0.96±0.07 0.97±0.06 0.99±0.06注：数据用平均值±标准误，*表示与对照组差异显著（P<0.05），下表同。
CREB mRNA 表达量无显著影响。CREB mRNA 表达量在 X1 至 X6 时期较 C 组比较均无显著变化（P>0.05）；BDNF mRNA表达量在 X3 和 X4 时期较 C 组下降明显，分别降低了 7%和 8%（P<0.05），其他时期无显著变化；c-jun 的 mRNA 表达量的最低值出现在 X4 时期，X3、X4、X5 和 X6 时期的 mRNA 表达量较 C 组均显著降低，分别降低了 12%、14%、9%和 8%（P<0.05）；c-fos 的 mRNA 表达量 X3、X4 和 X5 时期下降明显，分别较 C 组水平下降了 8%、9%和 8%（P<0.05）；fos-b mRNA表达量在 X3、X4、X5 和 X6 时期下降明显，与 C 组 fos-b mRNA 表达量比较，分别下降了12%、11%、14%和 15%（P<0.05），差异显著。表 3-4 CREB、BDNF、c-jun、c-fos 和 fos-b mRNA 表达量的变化Tab. 3-4 Change of CREB, BDNF, c-jun, c-fos and fos-b mRNA expressionC X1 X2 X3 X4 X5 X6CREB 1 0.97±0.05 0.96±0.05 0.95±0.05 0.98±0.04 0.95±0.05 0.96±0.05BDNF 1 1.02±0.06 1.04±0.05 0.93±0.06* 0.92±0.05* 1.00±0.05 1.02±0.06c-jun 1 0.95±0.07 0.96±0.06 0.88±0.06* 0.86±0.06* 0.91±0.06* 0.92±0.06*c-fos 1 1.01±0.05 0.99±0.04 0.92±0.04* 0.95±0.05* 0.92±0.05* 0.98±0.05fos-b 1 0.97±0.08 0.94±0.06 0.88±0.07* 0.89±0.06* 0.86±0.07* 0.85±0.07*
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