内皮型一氧化氮合酶缺失对缺血性脑卒中后病态行为的影响

发布时间：2017-06-24 09:05

  本文关键词：内皮型一氧化氮合酶缺失对缺血性脑卒中后病态行为的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：缺血性脑卒中(Ischemic stroke)是急性脑血管疾病,亦是全世界导致残疾的主要元凶之一,其病因是由于血流在大脑中阻断后,神经损伤迅速爆发。脑卒中后会出现一系列的病态行为如痴呆、抑郁、焦虑和疲劳,严重影响功能恢复。近年来,发生缺血性脑卒中的患者持续上升,但是人们对于缺血性脑卒中的生理学和病理生理学方面的了解知之甚少。尽管临床上主要以药物治疗控制病情,针对缺血性卒中具体预防和改善治疗的措施尚未阐明。其中,研究发现内皮型一氧化氮合酶(e NOS)在神经系统功能和认知功能中发挥着重要的作用。同时研究显示内皮型一氧化氮合酶缺陷症(e NOS~(-/-))的小鼠在卒中后表现出运动功能恢复障碍。然而,内皮型一氧化氮合酶在缺血性卒中后介导记忆和行为恢复的作用尚未清楚。本实验拟通过研究内皮型一氧化氮合酶缺陷型小鼠和野生型小鼠,检测这两种小鼠在缺血模型建立后的行为学差异和小胶质细胞的表达差异,从而查证内皮型一氧化氮对神经康复的作用。方法:1.将34只雄性c57 BL/6野生型(Wild type,WT)小鼠和35只雄性e NOS~(-/-)敲基因小鼠分别随机分为两组:假手术组和模型组。以大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)法建立小鼠局灶性脑缺血模型,缺血1小时之后拔线实现再灌注。假手术组小鼠只进行术前麻醉和血管分离,不结扎血管及插入线栓。2.各组在造模后四周内检测功能结果,包括:神经行为学评分、肢体不对称性功能障碍(圆筒实验)、感觉运动功能(胶布移除实验)和空间记忆能力(Morris水迷宫试验)。3.术后28天后处死小鼠,大脑取材,用尼氏染色法检测中枢系统损伤程度;应用免疫组化方法测量小胶质细胞的表达情况;运用酶联免疫吸附试验检测干扰素γ(Interferon-γ,IFN-γ)蛋白的表达强度。结果:1.在MCAO手术两周后,e NOS~(-/-)模型组的小鼠相比于WT模型组需要更长的时间来完成圆筒实验(p0.05)。2.在水迷宫实验中,e NOS~(-/-)模型组与WT模型组相比,其无法游泳的小鼠数量明显增加(p=0.002)。各组能够参加水迷宫试验的小鼠中,e NOS~(-/-)模型组的小鼠需要较长时间去完成空间记忆测试,与WT模型组相比差异有统计学意义(p=0.004)。3.在MCAO手术后的第三周,e NOS~(-/-)模型组与WT模型组在神经行为学评分、胶布移除实验和偏侧性指数里均没有统计学差异。说明e NOS~(-/-)模型组中,表现较差的小鼠与神经或运功功能损伤无关。4.28天后取脑组织进行免疫荧光染色,结果显示WT模型组脑部损伤区纹状体的小胶质细胞数量与正常区域相比明显上升(p=0.020)。但是这一上升的结果在e NOS~(-/-)模型组的同一区域明显减少(p=0.039)。而且相对于WT模型组,IFN-γ的表达量在e NOS~(-/-)模型组小鼠大脑内也明显下降(p0.001)。结论:1.脑卒中后内皮型一氧化氮合酶的缺失对大脑空间记忆造成损伤。2.内皮型一氧化氮缺陷小鼠在脑卒中后造成运动障碍。3.脑卒中后内皮型一氧化氮合酶的缺失导致小胶质细胞在受损纹状体的聚集受到抑制。4.脑缺血再灌注损伤后,e NOS的缺失抑制梗死区域的IFN-γ增加,可能参与炎症级联反应。
【关键词】：内皮型一氧化氮合酶 缺血性脑卒中 空间记忆 神经炎症
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 序言11-16
• 材料与方法16-27
• 1 实验材料16-19
• 1.1 实验动物16
• 1.2 主要试剂16-17
• 1.3 主要仪器及耗材17-18
• 1.4 常用试剂的配制18-19
• 2 实验方法19-27
• 2.1 动物分组19-20
• 2.2 暂时性大脑中动脉阻断模型制作20-21
• 2.3 行为学测试21-23
• 2.3.1 神经功能评分21
• 2.3.2 圆筒实验21-22
• 2.3.3 胶布移除实验22
• 2.3.4 Morris水迷宫试验22-23
• 2.4 免疫组织化学23-24
• 2.5 脑组织提取及定量24-25
• 2.6 酶联免疫吸附试验25-26
• 2.7 统计学分析26-27
• 结果27-38
• 1 小鼠MCAO模型后的存活指标27-29
• 1.1 各组存活率比较27-28
• 1.2 各组体重差比较28-29
• 2 野生组和eNOS~(-/-)组在MCAO模型后功能恢复的比较29-35
• 2.1 各组神经行为学结果30-31
• 2.2 各组圆筒测试结果31-32
• 2.3 各组胶布移除实验结果32-33
• 2.4 各组水迷宫实验结果33-35
• 3 野生组和eNOS~(-/-)组在MCAO模型后神经炎症因子的比较35-38
• 3.1 模型组各组小胶质细胞表达量比较35-36
• 3.2 各组 γ 干扰素表达量比较36-38
• 讨论38-43
• 1. eNOS对空间记忆发挥重要作用38-40
• 2. eNOS基因缺陷可能导致抑郁行为的产生40-41
• 3. 脑卒中发生后eNOS与促进炎症级联反应相关41-43
• 结论43-44
• 参考文献44-52
• 中英文缩略词表52-53
• 攻读学位期间发表的论文53-54
• 致谢54

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