时钟报告基因体系的研究

发布时间：2017-06-29 23:06

  本文关键词：时钟报告基因体系的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的时钟报告基因检测体系广泛应用于昼夜节律的研究，为了使用该体系分析血清中节律因子的差异，需要回答三个问题。第一，据文献记载，时钟报告基因体系在检测荧光信号时，其培养基中不含血清成分。因此需要明确在培养基中添加血清是否影响细胞的状态，是否影响对于荧光信号的检测；第二，需要明确不同时间点采集的血样是否含有不同的节律信号分子。第三，需要分析麻醉剂对于分子时钟的影响，以选择合适的麻醉方法。 方法分别使用含胎牛血清和B27的培养基，培养表达报告基因Per2-dluc和Bmal1-dluc的U2OS细胞，通过形态学、台盘蓝计数和流式细胞分析方法比较不同培养条件下细胞生长、增殖和细胞周期水平的差异；使用Lumicycle系统检测细胞中Bmal1和Per2表达昼夜波动水平的差异。使用三氯乙醇（TCOH，水合氯醛的主要药效成分）处理表达Bmal1-dluc或Per2-dluc的U2OS细胞，分析TCOH是否直接影响分子时钟。使用水合氯醛或二氧化碳麻醉大鼠的血清，培养表达Bmal1-dluc或Per2-dluc的U2OS细胞，分析基因昼夜表达波动水平的差异。 结果含胎牛血清和B27的培养基两种培养条件下细胞生长、增殖、细胞周期以及Bmal1和Per2表达昼夜波动均无明显差异。采集于不同时间点的血清，其诱导细胞节律同步化的功能基本相似。在1.5mM的TCOH作用下，，Bmal1的表达波动周期延长了3h，在3mM的TCOH作用下，Bmal1的表达波动周期延长5小时。但是，低浓度TCOH对于Bmal1的表达波动周期无明显影响。TCOH对于Per2的表达波动周期无明显影响。水合氯醛麻醉的大鼠的血清也具有调节Bmal1表达波动周期的效果，提示进行昼夜节律研究中需要选择合适的麻醉方法。 结论U2OS细胞可以用于分析血清中节律因子的分析；不同时间采集血清样进行分析是一种可行的方式；TCOH能够直接调控分子时钟；不能使用水合氯醛麻醉动物以进行血清节律分子的研究。
【关键词】：Bmal1 昼夜节律 血清刺激 三氯乙醇 报告基因
【学位授予单位】：首都医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R440;Q78
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-10
• 第一部分：分子时钟报告基因体系用于血清节律因子分析的优化10-28
• 1.材料与方法10-17
• 2.结果17-23
• 3. 讨论23-25
• 参考文献25-28
• 第二部分：三氯乙醇对于分子时钟的调控的研究28-49
• 1. 材料与方法28-37
• 2. 结果37-43
• 3. 讨论43-44
• 结论44-45
• 参考文献45-49
• 文献综述49-77
• 参考文献62-77
• 攻读学位期间发表文章情况77-78
• 致谢78-79
• 个人简历79

【共引文献】

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本文编号：499639