EGCG对铅暴露小鼠学习记忆能力及海马组织RAGE蛋白表达的影响

发布时间：2017-07-30 13:36

  本文关键词：EGCG对铅暴露小鼠学习记忆能力及海马组织RAGE蛋白表达的影响

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【摘要】：目的用表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对铅致阿尔茨海默病样病变(Alzheimer’s disease,AD)小鼠进行干预,观察EGCG对小鼠空间学习记忆能力、海马组织抗氧化酶活性、RAGE和Aβ蛋白表达的影响,探讨EGCG对铅致AD样病变小鼠神经保护作用机制。方法取21天断乳的健康清洁级C57BL/6雄性小鼠50只,按照体重随机分为5组:对照组、染铅模型组、低(Pb+1.5 mg/kg EGCG)、中(Pb+3.0 mg/kg EGCG)、高(Pb+4.5 mg/kg EGCG)剂量干预组。染铅模型组和干预组以自由饮水的形式饮用0.2%的醋酸铅水溶液,对照组饮用去离子水,持续喂养8周进行铅染毒。染毒结束后,采用不同浓度的EGCG溶液对干预组小鼠等体积灌胃4周用于实验,而对照组和染铅模型组采用生理盐水进行灌胃,每4周测量小鼠体重。干预结束后,进行Morris水迷宫实验。水迷宫结束后次日,将小鼠麻醉后以摘眼球法采集全血,在冰上迅速剥离脑组织并取出海马。用石墨炉原子吸收光谱仪测定血铅含量;用相应试剂盒分别测定海马组织抗氧化物酶活性和丙二醛(malondialdehvde,MDA)含量;采用Western blot分析海马组织高级糖基化终末产物受体(the receptor for advanced glycation end products,RAGE)蛋白表达水平;ELISA试剂盒测定海马组织Aβ_(1-40)、Aβ_(1-42)含量。结果体重结果显示:在第7周龄和第11周龄,染铅模型组、不同剂量干预组与对照组相比,体重明显降低,差异具有统计学意义(P0.05);用EGCG干预4周后,中、高剂量干预组体重高于染铅模型组,差异具有统计学意义(P0.05)。水迷宫结果:染铅模型组平均逃避潜伏期高于对照组,中、高剂量干预组低于染铅模型组,差异具有统计学意义(P0.05)。第6天,染铅模型组穿越平台次数低于对照组;中、高剂量干预组高于染铅模型组,差异具有统计学意义(P0.05)。血铅含量:染铅模型组和不同剂量干预组高于对照组,差异有统计学意义(P0.01),不同剂量干预组与染铅模型组比较,血铅含量降低,差异无统计学意义(P0.05)。抗氧化酶活性结果显示:染铅模型组、低剂量干预组与对照组比较,总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)抗氧化酶活性显著降低,MDA含量明显升高(P0.05),中、高剂量EGCG干预组酶活性高于染铅模型组,MDA含量明显降低(P0.05)。Western blot结果显示:染铅模型组RAGE蛋白表达最高,空白对照组最低,干预组中随着干预剂量的增加,表达有下降趋势;不同剂量干预组蛋白表达低于染铅模型组,差异均具有统计学意义(P0.05)。ELISA测量Aβ_(1-40)、Aβ_(1-42)含量结果显示:染铅模型组Aβ_(1-40)、Aβ_(1-42)含量最高,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.01);中、高剂量干预组低于染铅模型组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论1.铅暴露可使小鼠血铅含量升高,延缓体重增长,损伤小鼠空间学习记忆能力。铅暴露还可降低海马组织抗氧化酶活性,增加Aβ_(1-40)、Aβ_(1-42)蛋白含量和RAGE蛋白表达量。2.EGCG干预可拮抗铅暴露引起的小鼠学习记忆能力下降,Aβ_(1-40)、Aβ_(1-42)蛋白含量增多,这一保护作用可能是通过提高海马组织抗氧化酶活性和降低RAGE蛋白表达量拮抗相关的氧化应激途径实现的。
【关键词】：铅 EGCG 氧化应激 RAGE 学习记忆能力 小鼠
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 英文缩略语词表12-13
• 1 引言13-17
• 2 材料和方法17-31
• 2.1 材料17-20
• 2.1.1 研究对象17
• 2.1.2 主要实验试剂17-18
• 2.1.3 主要实验仪器18
• 2.1.4 主要实验试剂的配置18-20
• 2.2 实验方法20-31
• 2.2.1 动物模型的建立与饲养条件20
• 2.2.2 小鼠体重的称量20-21
• 2.2.3 Morris水迷宫行为学检测21
• 2.2.4 血液和海马组织标本的采集21
• 2.2.5 小鼠血铅含量的测定21-22
• 2.2.6 海马组织氧化应激相关因子测定22-25
• 2.2.7 酶联免疫法检测海马组织中Aβ_(1-40)、Aβ_(1-42)含量25-27
• 2.2.8 蛋白质免疫印记法检测海马组织RAGE蛋白表达27-31
• 3 结果31-41
• 3.1 EGCG干预对小鼠体重变化的影响31-32
• 3.2 Morris水迷宫实验结果32-34
• 3.3 血铅含量测定结果34-35
• 3.4 EGCG干预对各实验组小鼠海马组织氧化应激相关因子的影响35-37
• 3.5 ELISA法检测各实验组小鼠海马组织Aβ_(1-40)、Aβ_(1-42)含量37
• 3.6 各实验组小鼠海马组织RAGE蛋白Western blot分析37-38
• 3.7 相关性分析38-41
• 4 讨论41-49
• 4.1 动物模型的构建及动物基本情况监测41-42
• 4.2 小鼠血铅含量42-43
• 4.3 Morris水迷宫实验结果43-44
• 4.4 EGCG对铅暴露小鼠氧化损伤的拮抗作用44-45
• 4.5 EGCG干预对铅暴露小鼠海马组织Aβ_(1-40)、Aβ_(1-42)含量的影响45-46
• 4.6 EGCG干预对铅暴露小鼠RAGE蛋白表达的影响46-49
• 5 结论49-51
• 参考文献51-57
• 综述57-77
• 参考文献71-77
• 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果77-79
• 致谢79

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