黄芪解毒汤干预乳腺癌细胞凋亡及影响Notch信号转导通路活性的实验研究

发布时间：2017-07-31 20:08

  本文关键词：黄芪解毒汤干预乳腺癌细胞凋亡及影响Notch信号转导通路活性的实验研究

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【摘要】：目的：探讨黄芪解毒汤体外干预人乳腺癌细胞MCF-7凋亡及对Notchl.Jagl基因和Cycl inDl蛋白表达影响,揭示本方抑制乳腺癌复发转移的作用机制。 方法：首先制备含药血清,12只雌性SD大鼠随机分为黄芪解毒汤含药血清组、阿霉素含药血清组、参一胶囊含药血清组、生理盐水血清组。并分别以等量黄芪解毒汤浓缩液、阿霉素溶液、参一胶囊溶液、生理盐水予大鼠灌胃3天,每天两次。于第四天第7次灌胃后,水合氯醛麻醉,腹主动脉取血后制备含药血清。以含药血清干预人乳腺癌细胞MCF-7,并以MTT检测不同含药血清对细胞抑制的影响,流式细胞仪检测其在体外实验中对MCF-7乳腺癌细胞凋亡的影响,RT-PCR检测Notchl及Jag1基因,Western-blot检测CyclinDl蛋白表达的影响。以实验探究黄芪解毒汤防治乳腺癌的机理。 结果： 1.MTT：与生理盐水血清组比较,加入含药血清的组别均具有一定诱导MCF-7细胞凋亡的作用,除5%浓度外含药血清组的OD值与其生理盐水血清组比较差异均有统计性意义(P0.05),且阿霉素组抑制率最高,其次为黄芪解毒汤组,最后为参一胶囊组； 2.流式细胞仪测细胞凋亡：含药血清的组别均具有一定诱导MCF-7细胞凋亡的作用其与生理盐水组间差异有统计学意义(P0.05),且阿霉素组凋亡率最高,其次为黄芪解毒汤组,最后为参一胶囊组； 3.RT-PCR检测Notchl及Jag1基因表达：生理盐水血清组相比,被含药血清干预的细胞中Notchl及Jag1基因表达明显降低且有统计学意义(P0.05),且阿霉素组表达最低,其次为黄芪解毒汤组,最后为参一胶囊组； 4.West ern-blot检测CyclinDl蛋白表达：与生理盐水血清组相比,含药血清干预后的细胞中CyclinDl蛋白表达减少,且阿霉素组表达最低,其次为黄芪解毒汤组,最后为参一胶囊组。 结论： 1.黄芪解毒汤可诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡；2.黄芪解毒汤可显著降低人乳腺癌细胞MCF-7Notchl. Jagl基因的表达： 3.黄芪解毒汤可显著降低人乳腺癌细胞MCF一7CyclinDl蛋白表达； 为黄芪解毒汤在乳腺癌术后治疗中的作用提供实验依据。
【关键词】：MCF-7 Notch1 Jag1 CyclinD1 血清 黄芪解毒汤
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 中英文缩写索引10-11
• 引言11-13
• 第一部分 黄芪解毒汤对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的研究13-20
• 1 材料13-14
• 1.1 实验动物13
• 1.2 细胞株13
• 1.3 主要试剂及其配制13
• 1.4 实验设备13
• 1.5 实验药物13-14
• 2 实验方法14-16
• 2.1 药物浓缩液配制14
• 2.2 含药血清的制备14
• 2.3 细胞培养、传代、冻存、细胞悬液制备及细胞计数14-15
• 2.4 MTT比色法检测药物对MCF-7细胞增殖的影响15-16
• 2.5 流式细胞仪检测MCF-7细胞凋亡16
• 3 统计学处理16
• 4 结果与分析16-20
• 4.1 MTT结果16-18
• 4.2 流式细胞法检测含药血清对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响18-20
• 第二部分 黄芪解毒汤对人乳腺癌MCF-7细胞Notch1及Jag1基因表达的影响20-28
• 1 材料20
• 1.1 实验动物20
• 1.2 细胞株20
• 1.3 主要试剂及其配制20
• 1.4 实验设备20
• 2 实验方法20-23
• 2.1 细胞培养及含药血清的制备20
• 2.2 RT-PCR检测Notch1及Jag1基因表达20-23
• 3 统计学处理23
• 4 结果与分析23-28
• 第三部分 黄芪解毒汤对人乳腺癌MCF-7细胞CyclinD1周期蛋白表达的影响28-32
• 1 材料28-29
• 1.1 实验动物28
• 1.2 细胞株28
• 1.3 主要试剂及其配制28-29
• 1.4 实验设备29
• 2 实验方法29-30
• 2.1 细胞培养及含药血清的制备29
• 2.2 Western-blot检测CyclinD1蛋白表达29-30
• 3 统计学处理30
• 4 结果与分析30-32
• 第四部分 讨论32-38
• 1 古代医学对乳腺癌的认识及治疗32-33
• 1.1 古代医学对乳腺癌认识32
• 1.2 中医中药对乳腺癌的治疗进展32
• 1.3 中医干预乳腺癌实验研究进展32-33
• 2 现代医学对乳腺癌的认识及治疗33-34
• 2.1 现代医学对乳腺癌认识33
• 2.2 现代医学对乳腺癌的治疗33-34
• 3 Notch信号通路与乳腺癌34-35
• 3.1 Notch信号通路34
• 3.2 Notch信号通路与乳腺癌的关系34-35
• 4 黄芪解毒汤的组方依据35
• 5 方药组成与配伍意义35-36
• 5.1 黄芪解毒汤方药组成36
• 5.2 配伍意义36
• 6 实验结果及展望36-38
• 第五部分 结论38-39
• 致谢39-40
• 参考文献40-44
• 附录A 图片44-46
• 附录B 综述46-56
• 参考文献54-56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：600907