ADAM8在DEN诱导的小鼠肝细胞癌发生发展过程中的表达与功能研究
发布时间:2017-08-01 06:05
本文关键词:ADAM8在DEN诱导的小鼠肝细胞癌发生发展过程中的表达与功能研究
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【摘要】:目的:本课题重点研究去整合素金属蛋白酶8(ADAM8)在肝细胞癌(HCC)的发生发展中的具体作用。方法:小鼠被分为5组:每组包含60只小鼠。A组小鼠在24周时间内,仅在每周1、3和5接受腹腔注射300μg/100μl抗ADAM8的单克隆抗体。治疗组B1、B2、B3和B4小鼠自由饮用含30μg·ml-1DEN的水24周来诱导肝细胞癌的发生。在每周1、3和5,B1、B2、B3和B4组小鼠分别腹腔注射PBS,100μg/100μl,200μg/100μl或300μg/100μl的抗ADAM8单克隆抗体。在实验结束的时候(24周末),小鼠被称重,然后用乙醚进行麻醉,通过心脏穿刺进行采血。我们统计了小鼠的生存率,即24周后存活小鼠的数量/开始实验时小鼠的数量×100。然后小鼠被处死,肝脏被取出。新鲜的肝脏用冰的盐水洗了两次,在干净的纸巾上吸干,称重。相对肝脏重量,即肝脏重量/最终体重×100,每只小鼠肝脏肿瘤部位的肝脏样品被分为两部分,它们分别用来进行组织学检测,蛋白印迹检测。对于组织学检测,肝脏样品在10%的甲醛溶液中固定24小时然后进行脱水和石蜡包埋。每个石蜡包埋的组织块切成6微米的片子,然后用来进行组织学检测。对于蛋白印迹检测,肝脏样品按照体积比(1:10)的比例加入PBS(0.02M,p H7.4)然后进行匀浆,匀浆后的样品被转移到离心管中,在4°C,10000rpm进行离心,中间层的蛋白样品被收集用作蛋白印迹检测。在另外一个实验中,60只小鼠仅自由饮用含30μg·ml-1 DEN的水24周来诱导肝细胞癌。我们利用蛋白印迹的方法检测了诱癌后0、8、16和24周小鼠肝脏ADAM8的表达水平。结果:抗ADAM8单克隆抗体的干预治疗显著提高了诱癌小鼠的生存率,减少了小鼠体重的损失和相对肝脏重量的增加,它是以一种剂量依赖的方式进行干预治疗的(P0.05或P0.01)。用抗ADAM8单克隆抗体进行干预治疗后也显著地降低了小鼠血清中AST和ALT的酶活性及AFP的表达水平(P0.05或P0.01),延缓了小鼠肝癌的发生与发展。与用PBS干预治疗的实验小鼠相比较,用抗ADAM8单克隆抗体干预治疗后增强了Caspase 3、Bax、P53(P0.05或P0.01)在小鼠肝脏组织中的表达,同时也抑制了VEGF-A、PCNA、Bcl-2在小鼠肝脏组织中的表达(P0.05或P0.01),且其表达情况与抗ADAM8单克隆抗体呈剂量依赖的关系。结论:我们的研究提示,ADAM8可能是通过调节这些因子的表达从而促进肝细胞癌的疾病发展,抗ADAM8单克隆抗体介入治疗可能会成为一种很有潜力的肝癌治疗方法。
【关键词】:肝癌 ADAM8 单克隆抗体 P53 Bcl-2
【学位授予单位】:河南科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R735.7
【目录】:
- 摘要3-5
- Abstract5-10
- 第1章 综述10-25
- 1.1 引言10-15
- 1.1.1 原发性肝细胞癌的流行病学10
- 1.1.2 原发性肝细胞癌的病理与病理生理10-11
- 1.1.3 原发性肝细胞癌的临床表现11
- 1.1.4 原发性肝细胞癌的诊断11-12
- 1.1.5 原发性肝细胞癌的分期与分级12-13
- 1.1.6 原发性肝细胞癌的临床治疗13-14
- 1.1.7 原发性肝细胞癌的预后14-15
- 1.2 原发性肝细胞癌形成的分子病理机制15-17
- 1.2.1 概述15
- 1.2.2 原发性肝细胞癌的形成15-17
- 1.3 原发性肝细胞癌的主要诱因17-21
- 1.3.1 概述17
- 1.3.2 丙型病毒性肝炎诱发肝细胞癌17-18
- 1.3.3 乙型病毒性肝炎诱发肝细胞癌18-19
- 1.3.4 黄曲霉毒素诱发肝细胞癌19-20
- 1.3.5 酒精诱发肝细胞癌20
- 1.3.6 脂肪变性诱发肝细胞癌20
- 1.3.7 其它原因诱发肝细胞癌20-21
- 1.4 ADAM因子家族与ADAM8因子的研究新进展21-23
- 1.4.1 ADAM因子家族的分子构成及主要功能研究新进展21
- 1.4.2 ADAM8因子家族的分子构成及主要功能研究新进展21-22
- 1.4.3 ADAM8因子在原发性肝细胞癌发生发展中的重要作用22-23
- 1.5 二乙基亚硝胺(DEN)诱导的肝癌模型23-25
- 第2章 前言25-27
- 第3章 材料与方法27-39
- 3.1 实验材料27
- 3.2 主要仪器27-28
- 3.3 主要试剂及配制28-29
- 3.4 实验具体操作方法及分组29-38
- 3.4.1 实验组的设计29-30
- 3.4.2 小鼠血清AST、ALT、AFP检测30-32
- 3.4.3 小鼠肝脏组织病理学检查32-33
- 3.4.4 小鼠诱导肝癌后第24周结束时PCNA、Caspase 3 的免疫组织化学染色33-34
- 3.4.5 小鼠诱导肝癌后第24周结束时用TUNEL法进行肝细胞凋亡分析34-36
- 3.4.6 用Western blot法测定VEGF-A、PCNA、Caspase 3、Bcl2、Bax、P53、ADAM8因子的蛋白表达水平36-38
- 3.5 数据分析38-39
- 第4章 结果39-42
- 4.1 抗ADAM8单克隆抗体在原发性肝细胞癌小鼠中的介入治疗效果(存活率、体重、相对肝重量)39
- 4.2 第24周结束时原发性肝细胞癌小鼠血清中AST、ALT、AFP的水平变化39
- 4.3 用HE染色法分析小鼠诱导为原发性肝细胞癌后肝脏的病理变化39-40
- 4.4 通过PCNA的免疫组织化学染色方法测定抗ADAM8单克隆抗体干预治疗对小鼠肝细胞增殖的效果40
- 4.5 通过TUNEL和Caspase 3 的免疫组织化学染色方法测定ADAM8单克隆抗体干预治疗后对小鼠肝细胞凋亡的效果40
- 4.6 用Western blot法检测分析ADAM8在DEN诱导的小鼠原发性肝细胞癌病理进程中的表达40
- 4.7 通过用Western blot法检测分析小鼠肝脏组织中的VEGF-A、PCNA、Caspase 3、Bcl-2、Bax、P53的蛋白表达水平来测定抗ADAM8单克隆抗体的干预治疗效果40-42
- 第5章 讨论42-46
- 5.1 ADAM8因子对肝癌组织新生血管的影响作用42-43
- 5.2 ADAM8因子对原发性肝癌细胞增殖的影响作用43-44
- 5.3 ADAM8因子对肝癌细胞调亡的影响作用44-45
- 5.4 ADAM8因子对肿瘤抑制基因P53的影响作用45
- 5.5 问题与展望45-46
- 第6章 结论46-47
- 参考文献47-57
- 缩略语词汇表57-58
- 附录 图表与说明58-72
- 致谢72-73
- 攻读学位期间的研究成果73
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 李果;夏锋;;肝细胞癌的分子分型研究进展[J];实用临床医药杂志;2010年13期
,本文编号:602797
本文链接:https://www.wllwen.com/yixuelunwen/mazuiyixuelunwen/602797.html
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