去铁胺在大鼠脑外伤急性期的保护作用及其内源性机制
本文关键词：去铁胺在大鼠脑外伤急性期的保护作用及其内源性机制
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【摘要】：【目的】以去铁胺(deferoxamine,DFX)干预大鼠控制性皮质撞击损伤(controlled cortical impact,CCI)模型,通过检测伤后半影区内源性保护因子缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)、脑红蛋白(neuroglobin,Ngb)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,以及检测半影区血管再生、神经细胞凋亡及对急性期损伤灶体积变化情况,探讨DFX在脑外伤急性期中的保护作用及其内源性机制。【方法】SD大鼠90只,随机分为3组:假手术组(n=30)、实验组(n=30)和对照组(n=30)。实验组和对照组大鼠分别建立CCI模型,假手术组同样麻醉开颅手术但不致伤。实验组大鼠伤后2h、6h腹腔注射DFX(100mg/kg),此后每12h重复给药一次;对照组大鼠在相同时间点腹腔注射等量的生理盐水。各组大鼠分别于术后6h、12h、24h、48h取6只断头取脑,取损伤半影区脑组织,应用RT-PCR及Western-Blot方法检测HIF-1α、Ngb、VEGF的蛋白及mRNA表达情况,并用TUNEL法检测神经细胞凋亡。每组各6只大鼠于伤后3d分别先进行3.0T MRI检查,选T2序列图像计算损伤灶体积,然后断头取脑,应用免疫组化方法检测伤后3d大鼠半影区脑组织的微血管密度。【结果】大鼠损伤灶半影区脑组织实验组和对照组HIF-1αmRNA的表达在伤后早期即显著增高,均在伤后12h达高峰(分别为假手术组的3.2倍、4.3倍),随后缓慢下降,但直到伤后48h仍维持在较高的表达水平(分别为假手术组的2.2倍、3.4倍),伤后6h、12h、24h、48h实验组大鼠HIF-1αmRNA表达均显著高于对照组(P㩳0.01);对照组大鼠HIF-1α蛋白表达早期即迅速增高,伤后6h以后呈逐渐降低趋势,但直到伤后48h仍显著高于假手术组(P㩳0.01)。实验组大鼠HIF-1α蛋白表达早期增高,在伤后12h达高峰,直到伤后48h仍维持在较高的表达水平。伤后12h、24h、48h实验组大鼠HIF-1α蛋白表达均高于对照组(P㩳0.05)。对照组和实验组Ngb mRNA的表达在伤后早期即显著增高,均在伤后12h达高峰(分别为假手术组的2.6倍、3.3倍),且直到伤后48h仍维持在较高的表达水平(分别为假手术组的1.7倍、2.6倍)。伤后12h、24h、48h实验组大鼠Ngb mRNA表达均高于对照组(P㩳0.05);对照组和实验组大鼠Ngb蛋白表达在伤后早期即显著增高,对照组在伤后12h达高峰,实验组在伤后24h达高峰,直到伤后48h实验组和对照组均维持在较高的表达水平。伤后12h、24h、48h实验组Ngb蛋白表达均高于对照组(P㩳0.05)。实验组和对照组大鼠VEGF的基因和蛋白表达在伤后均逐渐升高,伤后24h、48h表达趋于平缓,但仍维持在较高水平,实验组大鼠VEGF的基因和蛋白表达在伤后6h、12h、24h、48h均高于对照组(P0.05)。Tunel检测显示伤后6h、12h、24h、48h实验组大鼠神经细胞凋亡较对照组明显减少(P0.05);伤后3d实验组大鼠微血管密度高于对照组(P0.05),且实验组伤灶体积小于对照组(P0.05)。【结论】(1)DFX在脑外伤急性期能诱导HIF-1α、Ngb及VEGF的基因和蛋白表达。(2)DFX在脑外伤急性期能促进半影区脑组织血管再生,减少神经细胞凋亡,缩小损伤灶体积,具有脑保护作用。(3)DFX的脑保护作用可能与诱导HIF-1α的表达间接促进内源性脑保护因子Ngb、VEGF的表达,进而促进血管再生、减少神经细胞凋亡有关。
【关键词】：去铁胺 缺氧诱导因子1α 脑红蛋白 血管内皮生长因子 凋亡 微血管密度
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R651.15
【目录】：
- 摘要4-6
- ABSTRACT6-11
- 绪论11-15
- 1. 材料15-19
- 1.1 实验动物15
- 1.2 主要试剂与耗材15-17
- 1.3 主要仪器与设备17-19
- 2. 方法19-27
- 2.1 实验动物分组及处理19
- 2.2 动物模型的制备19
- 2.3 大鼠心脏灌注取脑及取材19-20
- 2.4 RT - PCR检测HIF -1Α、NGB、VEGF MRNA表达20-22
- 2.5 WESTERN BLOT检测HIF-1Α、NGB、VEGF的蛋白表达22-25
- 2.6 免疫组化染色计算微血管密度25-26
- 2.7 TUNEL法检测神经细胞凋亡26
- 2.8 3.0T MRI检测伤灶体积26-27
- 3. 结果27-30
- 3.1 RT-PCR检测HIF-1Α、NGB、VEGF MRNA表达27
- 3.2 WESTERN BLOT检测HIF-1Α、NGB、VEGF蛋白表达27-28
- 3.3 DFX对CCI后神经细胞凋亡的影响28
- 3.4 DFX对CCI后脑组织微血管再生的影响28-29
- 3.5 DFX对CCI后伤灶体积的影响29-30
- 4. 讨论30-35
- 4.1 脑外伤动物模型30
- 4.2 DFX的研究现状30-31
- 4.3 DFX对脑外伤后NGB表达的影响31-32
- 4.4 DFX对脑外伤后VEGF表达的影响32
- 4.5 DFX对脑外伤后HIF-1Α 的表达的影响32-33
- 4.6 DFX在脑外伤急性期的保护作用及其机制33-35
- 5. 总结35-36
- 参考文献36-40
- 附图40-48
- 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文48-49
- 中英文缩略词表49-50
- 致谢50-52
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本文编号：614509
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