益精方对腺嘌呤法大鼠睾丸支持细胞紧密连接蛋白及调控因子影响的实验研究

发布时间：2017-08-13 00:21

  本文关键词：益精方对腺嘌呤法大鼠睾丸支持细胞紧密连接蛋白及调控因子影响的实验研究

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【摘要】：目的:观察益精方对腺嘌呤法诱导的不育症模型大鼠睾丸支持细胞紧密连接蛋白及动力学调控因子的表达水平的影响,从紧密连接状态来探讨男性不育的机理。材料与方法:选用48只健康的Wistar雄性大鼠,SPF级,2月龄,体重180g左右,按随机数字表法平均分为4组:空白组,模型组,复方玄驹胶囊组和益精方组。造模期间,除空白组外,其余三组均以腺嘌呤1 m L/(100g·d)的剂量灌胃,连续灌胃12天即造模结束;从第13天开始,空白组及模型组用生理盐水灌胃,复方玄驹组和益精方组分别以复方玄驹胶囊水溶液及益精方汤剂灌胃,每天一次,连续20天。实验结束后麻醉大鼠,无菌条件下于腹主动脉取血10m L,摘取睾丸和附睾,采用计算机精子分析系统计数精子密度和精子活动率;采用酶联免疫吸附法(ELISA法)对各组大鼠血清中睾酮(T)的含量进行检测;采用免疫组化技术测定大鼠睾丸组织中JAMS蛋白,ZOS蛋白的表达;采用RT-PCR技术测定TGF—β3、Ca2+-ATP酶、PKA的m RNA情况表达。结果:1.与空白组比较,模型组动物精子活动率、密度及血清睾酮T均明显下降(P0.01);与模型组比较,益精方组及复方玄驹胶囊组精子活动率、密度及血清睾酮T均有明显提高(P0.01)。2.与空白组比较,模型组JAMS和ZOS蛋白水平明显下降(P0.01);与模型组比较,益精方组JAMS和ZOS蛋白水平升高(P0.05),复方玄驹胶囊组升高不明显(P0.05)。3.与空白组比较,模型组中TGF-β3及TGF-β3 mRNA的表达升高(P0.01);与模型组比较,益精方组中TGF-β3及TGF-β3 m RNA的表达有所下降(P0.05),复方玄驹胶囊组下降不明显(P0.05)。4.与空白组比较,模型组中Ca2+-ATP酶m RNA、PKAm RNA的表达均降低(P0.01)。与模型组比较,益精方组中Ca2+-ATP酶m RNA、PKAm RNA的表达均有所提高(P0.05),复方玄驹胶囊组提高不明显(P0.05)。结论:1.腺嘌呤能够降低精子的密度和活力及血清睾酮T的水平,导致大鼠睾丸生殖能力降低;同时使JAMS,ZOS蛋白的表达减少,TGF-β3及TGF-β3 m RNA的表达升高及Ca2+-ATP酶m RNA、PKAm RNA的表达降低,说明腺嘌呤能够破坏紧密连接平衡状态,使血睾屏障通透性增高,导致生精障碍。2.益精方能够提高腺嘌呤法诱导的肾阳虚模型大鼠的精子密度、精子活动率和血清睾酮T浓度,使JAMS和ZOS蛋白表达的水平增多;同时对TGF-β3及TGF-β3m RNA的高表达具有明显的抑制作用,对Ca2+-ATP酶m RNA、PKAm RNA的低表达具有明显的拮抗作用,证明了益精方能够改善腺嘌呤损伤的大鼠睾丸支持细胞紧密连接功能,恢复大鼠的生殖能力。
【关键词】：益精方 腺嘌呤 TJ BTB TGF-β3
【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 英文缩略语8-9
• 前言9-11
• 材料与方法11-20
• 实验结果20-27
• 讨论27-33
• 小结33-34
• 结论34-35
• 本研究创新性的自我评价35-36
• 参考文献36-41
• 附录 综述41-53
• 参考文献49-53
• 个人简介53-54
• 在学期间科研成绩54-55
• 致谢55

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本文编号：664432