ANG及其突变体与RI相互作用对膀胱癌血管生成的影响及分子机制研究

发布时间：2017-10-09 23:38

  本文关键词：ANG及其突变体与RI相互作用对膀胱癌血管生成的影响及分子机制研究

  更多相关文章： 血管生成素 血管生成 核糖核酸酶抑制因子 蛋白相互作用 突变体

【摘要】：目的研究血管生成素(ANG)及其突变体与核糖核酸酶抑制因子(对)蛋白的相互作用,探讨两者相互作用对膀胱癌血管生成的影响及分子机制。方法1.以pCMV-3xflag-ANG为模板,用高保真的Pyrobest聚合酶进行突变反应得到pCMV-3xflag-ANGH13R和pCMV-3xflag-ANGH114R。以pcDNA3.1-RI为模板,pGEX-4T-1为载体扩增对序列,得到pGEX-4T-RI质粒用于后续的相互作用实验。2.胞内的相互作用采用免疫共沉淀、免疫荧光共定位法。胞外的相互作用采用GST融合蛋白下拉实验。3.将pEGFP-C1-ANGH13R、pEGFP-C1-ANGH114R、pEGFP-C1-ANG质粒(本课题组构建保存)转染人膀胱癌BIU87细胞,检测RI与ANG及其突变体相互作用对BIU87细胞的影响及介导PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白的影响。4.鸡胚绒毛尿囊血管实验和小管实验检测ANG及其突变体对人膀胱癌血管形成的影响。应用双荧光素酶报告基因检测过表达RJ对ANG及其突变体促rRNA转录活性的影响。5.肿瘤转移、肿瘤大小、肿瘤中微血管等通过建立BALB/C裸鼠模型检测。结果1.通过酶切和测序后,pGEX-4T-RI、pCMV-3 X flag-ANGH13R、 pCMV-3×flag-ANGH114R质粒构建成功。2.ANG及其突变体与对在人膀胱癌BIU87细胞内和细胞外都存在相互作用。3.通过转染稳定表达细胞株pEGFP-C1-ANGH13R, pEGFP-C1-ANGH114R(本课题组构建保存)后,检测AKT/PI3K/mTOR信号通路蛋白,结果表明各主要靶蛋白有明显变化。4.鸡胚绒毛尿囊(CAM)血管形成实验和小管形成实验检测ANG及其突变体均可促进肿瘤血管的形成。双荧光素酶报告基因系统检测RI可抑制核糖体rRNA(rRNA)的转录活性。5. BALB/c裸鼠模型显示,ANG及其突变体可促进移植瘤的生长和新生血管形成。结论1.ANG及其突变体与对在体内外均存在相互作用。2.ANG及其突变体可促进膀胱癌肿瘤血管形成。3.过表达RI抑制rRNA的转录活性。4.ANG及其突变体与RI的相互作用,介导和调节膀胱癌细胞BIU87的PI3K/AKT/mTOR信号通路可影响膀胱癌的肿瘤血管生长及肿瘤细胞增殖。
【关键词】：血管生成素 血管生成 核糖核酸酶抑制因子 蛋白相互作用 突变体
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.14
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 前言12-14
• 第一部分 突变质粒构建及鉴定14-18
• 1 材料14
• 2 方法14-16
• 3 实验结果16-18
• 第二部分 ANG及其突变体与对蛋白相互作用的研究18-25
• 1 材料18
• 2 方法18-21
• 3 实验结果21-25
• 第三部分 ANG及其突变体对膀胱癌体内外血管生成的影响及分子机制研究25-34
• 1 材料25
• 2 方法25-29
• 3 实验结果29-34
• 第四部分 ANG及其突变体对BALB/C裸鼠膀胱癌移植瘤生长和自发性转移的影响34-40
• 1 材料34
• 2 方法34-35
• 3 实验结果35-40
• 讨论40-42
• 参考文献42-45
• 文献综述45-56
• 参考文献51-56
• 致谢56-57
• 硕士期间发表的论文57

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本文编号：1003136