微环境在多囊肾病囊肿发生与发展中的作用及其机制研究

发布时间：2017-10-11 02:39

  本文关键词：微环境在多囊肾病囊肿发生与发展中的作用及其机制研究

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【摘要】：研究目的：本课题探讨了常染色体显性遗传多囊肾病(ADPKD)中囊肿衬里上皮细胞与巨噬细胞、肾小管上皮细胞构成的微环境对肾小管上皮细胞的影响,探寻其中可能发挥作用的因子及其相关机制。方法：1.建立小鼠巨噬细胞(RAW 264.7)与人肾囊肿衬里上皮细胞(Ox161细胞)共培养模型,以实时PCR技术与免疫印迹技术检测不同刺激因素对巨噬细胞极化的影响。2.建立MDCKⅡ细胞、小鼠巨噬细胞(RAW 264.7)与人肾囊肿衬里上皮细胞(Ox161细胞)三维共培养模型,比较MDCKⅡ细胞不同条件下囊泡直径。以免疫印迹技术检测MDCKⅡ细胞与多囊肾病相关通路蛋白的表达。3.以实时PCR技术、免疫印迹技术与酶联免疫吸附测定法检测小鼠巨噬细胞(RAW 264.7)与人肾囊肿衬里上皮细胞(Ox161细胞)不同共培养模式与刺激条件下TNF-α的表达与分泌。4.以实时PCR技术、免疫印迹技术检测MDCKⅡ细胞与小鼠巨噬细胞(RAW264.7)、人肾囊肿衬里上皮细胞(Ox161细胞)共培养条件下FIP2表达。5.繁殖并鉴定Pkd1 IKO小鼠,于4周龄予腹腔注射他莫昔芬诱导Pkdl基因敲除,于5周龄建立单侧肾脏缺血再灌注模型。6.收集Pkd1 IKO小鼠IRI急性期肾组织标本,免疫印迹法检测其TNF-α、FIP2蛋白的表达,实时PCR技术检测其TNF-α、FIP2表达。结果：1.三维培养条件下,与对照组相比,MDCKⅡ细胞与M2型巨噬细胞、囊肿衬里上皮细胞共培养,其囊泡直径明显增加(P0.05)。MDCKII细胞与M2型巨噬细胞、囊肿衬里上皮细胞共培养,其pSTAT3、pAkt、pERK、pCREB、PCNA表达增加。MDCKⅡ细胞与M1型巨噬细胞、囊肿衬里上皮细胞共培养,其FIP2蛋白表达增加。2. Pkd1 IKO小鼠单侧肾脏IRI后,急性期损伤侧肾脏TNF-α、FIP2表达增加,Cre+小鼠较Cre-小鼠肾脏损伤更重,FIP2表达更高。结论：细胞实验表明,ADPKD中囊肿衬里上皮细胞与巨噬细胞构成的微环境,可促进囊肿周围肾小管上皮增殖。微环境可能在肾损伤条件下,通过促进肾小管上皮细胞FIP2的表达升高,改变其纤毛功能与极性。结合动物实验结果,在“二次打击”存在的条件下,微环境中TNF-α浓度增高,可能参与“三次打击”,参与ADPKD的囊肿的形成和发展。
【关键词】：多囊肾 常染色体显性 微环境 巨噬细胞
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 缩略词表9-11
• 前言11-13
• 第一部分 肾囊肿微环境对肾小管上皮细胞增殖的影响及其相关机制13-37
• 前言13-15
• 实验设计15-17
• 材料与方法17-27
• 结果27-35
• 讨论35-37
• 第二部分 肾损伤条件下微环境的改变及对肾小管上皮细胞作用与机制的探讨37-58
• 前言37-39
• 实验设计39-41
• 材料与方法41-49
• 结果49-56
• 讨论56-58
• 全文总结58-59
• 参考文献59-63
• 综述63-73
• 参考文献66-73
• 在读期间完成和发表的文章73-74
• 致谢74

【共引文献】

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3 盛海莹;赵利霞;左艳萍;;磷脂酶C-γ1与组织细胞的增殖和迁移[J];河北医科大学学报;2014年02期

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1 刘东伯;塞来昔布抑制鼻咽癌细胞增殖的分子机制研究[D];华中科技大学;2013年

2 陶杰;CREG调控内皮细胞周期的作用机制研究及其在小鼠下肢缺血模型中的作用[D];第三军医大学;2013年

3 杨落落;枯否细胞在对乙酰氨基酚诱导的肝毒性损伤中的作用研究[D];吉林大学;2014年

4 刘东伯;塞来昔布抑制鼻咽癌细胞增殖的分子机制研究[D];华中科技大学;2013年

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1 杨柳;巨噬细胞在结核性肉芽肿形成和发展过程中的极化[D];南昌大学医学院;2013年

2 张鸿儒;肠道免疫系统中巨噬细胞和CD4~+T细胞之间的相互作用及机制[D];山东大学;2014年

3 赵永强;塞来昔布诱导喉癌Hep-2细胞凋亡及细胞周期阻滞的实验研究[D];山东大学;2014年

4 王亚民;环氧化酶-2表达在NK/T细胞淋巴瘤化疗耐药中的作用及其机制研究[D];安徽医科大学;2014年

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本文编号：1010074