丙戊酸钠通过对SMAD4的双重作用抑制前列腺癌上皮间质转化的机制

发布时间：2017-10-18 07:07

  本文关键词：丙戊酸钠通过对SMAD4的双重作用抑制前列腺癌上皮间质转化的机制

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【摘要】：研究背景前列腺癌在美国是最常见的男性恶性肿瘤,在中国,其发病率也逐年飙升。一旦发病,死亡率也很高。前列腺癌细胞有较高转移特性,上皮间质转化(EMT)在其中发挥重要作用,发生EMT的细胞会逐渐失去上皮细胞特性,形态学上更加细长,接近间质细胞形态,且获得间质细胞易于迁移的特性。EMT使得肿瘤细胞获得极大迁移特性,从而发生肿瘤转移,威胁患者生命。肿瘤细胞转移的分子机制以及如何抑制肿瘤转移一直是医学研究的重点课题,针对EMT,众多通路被认为参与其中,包括TGF-β、Notch、Wnt以及ERK/MAPK等。TGF-β通路在其中发挥重要作用,TGF-β下游的SMAD4又是此通路信息传递的重要一环,SMAD4可将携带上游信息的R-SMADs转运至细胞核内,从而调控转录翻译等过程,对细胞活动产生影响。因此,进一步明确其中的调控机制是首要问题,之后再结合前期研究,结合药物的生物学机制,研究药物在其中可以发挥的作用及其机制,对未来前列腺癌的治疗有重要意义。目的前期研究已证实丙戊酸钠(VPA)可以抑制前列腺癌转移,并减低TGF-β通路中重要分子SMAD4的蛋白质水平。VPA对前列腺癌细胞发生上皮间质转化有何影响、其影响作用如何产生等还亟待认识。方法培养前列腺癌细胞、建立前列腺癌动物模型,经VPA处理后,检测其中EMT标记物及SMAD4的表达水平,并与对照组比较。SMAD4蛋白分子的单泛素化水平也一同得到检测。应用质粒转染及shRNA技术调控细胞内SMAD4蛋白水平后,再检测EMT标记物水平及在VPA处理前后的变化,以验证VPA对SMAD4的作用是否影响VPA对EMT的作用。结果我们发现,在前列腺癌细胞及动物模型中,VPA都能明显升高E-cadherin水平(p0.05)并明显减低N-cadherin (p0.05)及Vimentin (p0.05)的表达水平。SMAD4的mRNA及蛋白水平在VPA处理下都减低(p0.05),我们同时发现,SMAD4的单泛素化水平在VPA处理后明显升高(p0.05)。敲除SMAD4可以明显升高E-cadherin表达水平,但SMAD4的过表达却能消除VPA对EMT的抑制作用,表明VPA对EMT的调控需要通过其对SAMD4的作用来实现。结论VPA通过减低SMAD4表达水平并升高其单泛素化水平来抑制前列腺癌EMT。未来VPA可以作为新的恶性肿瘤治疗药物。
【关键词】：丙戊酸钠 上皮间质转化 SMAD4 前列腺癌
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 符号说明10-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-18
• 1 材料13-14
• 1.1 细胞和细胞培养13
• 1.2 动物实验13
• 1.3 试剂和耗材13
• 1.4 主要仪器13-14
• 2 方法14-18
• 2.1 溶液配置14
• 2.2 细胞培养14-15
• 2.3 Western blotting检测15-16
• 2.4 实施荧光定量PCR检测16-17
• 2.5 免疫组化检测17
• 2.6 质粒转染17
• 2.7 动物模型的建立17
• 2.8 统计学分析17-18
• 结果18-24
• 1 VPA抑制前列腺癌细胞发生EMT18-19
• 2 VPA抑制SMAD4蛋白表达水平并升高其单泛素化水平19-20
• 3 VPA抑制裸鼠前列腺癌模型的生长20-21
• 4 VPA在动物实验中抑制前列腺癌EMT及SMAD4表达21-22
• 5 VPA抑制EMT的机制是通过其对SMAD4的抑制来实现22-24
• 讨论24-27
• 综述27-36
• 参考文献36-42
• 致谢42-43
• 硕士在读期间发表的论文目录43-44
• 学位论文评阅及答辩情况表44

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本文编号：1053613